GelRed是靈敏、穩(wěn)定、對(duì)環(huán)境安全的熒光核酸染料，用來替代劇毒性的溴化 乙錠（EB），用于瓊脂糖凝膠中dsDNA, ssDNA 或 RNA 的染色。事實(shí)上GelRed和EB擁有相同的光譜，所以可以用GelRed直 接替代EB而不用更換現(xiàn)有的成像系統(tǒng)。另外，GelRed的靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于EB。 GelRed? 在Biotium經(jīng)過一系列的測(cè)試，并且通過3個(gè)獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司評(píng) 估日常處理處置時(shí)染料的安全性。測(cè)試結(jié)果表明，染料對(duì)于手套和細(xì)胞膜都是 不能穿透的。在濃度遠(yuǎn)高于凝膠染色工作濃度的情況下，染料是無細(xì)胞毒性和 非誘變性的。GelRed?成功通過了按照CCR標(biāo)明的22項(xiàng)危險(xiǎn)廢物特征的環(huán)境 安全測(cè)試，這項(xiàng)條例沒有將GelRed?分類為危險(xiǎn)廢物。完整的安全檢測(cè)報(bào)告 可以在www.biotium.com網(wǎng)站上下載。
目前，大多數(shù)商業(yè)化的核酸凝膠染色試劑總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不能完全令人滿意。例如，EB 作為使用最廣泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)，且染色后背景熒光信號(hào)較高（圖1）。SYBR Green I 和SYBR Gold 也被宣傳為最靈敏的凝膠染色試劑。但SYBR Green I尤其是SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。SYBRsafe 被認(rèn)為是市場(chǎng)上較為安全的核酸染料，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及SYBR Green I，且毒性依然較高(圖3）。GelRed和GelGreen無論用于預(yù)制凝膠染色還是凝膠電泳后染色，都表現(xiàn)出了極高的靈敏度。為配合312nm-UV凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的GelRed，在使用了我們新開發(fā)的具有專利的試驗(yàn)步驟后（該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的NaCl溶液替代傳統(tǒng)的TBE緩沖溶液），在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于SYBR Gold。但與SYBR Gold 不同，GelRed 在預(yù)制凝膠中使用時(shí)仍然有極高的靈敏度。我們新開發(fā)的GelGreen 可以滿足使用488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見光激發(fā)的Dark Reader 的研究人員的使用要求。GelGreen 無論是在預(yù)制凝
膠還是凝膠電泳后染色中都與SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的穩(wěn)定性問題。實(shí)際上，GelRed 和GelGreen ，特別是GelRed非常穩(wěn)定，可以長期在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在TBE或者類似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備，長期保存。同樣重要的是，GelRed 和GelGreen 相比EB 或SYBR Green 提高了安全性。獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司（Litron Laboratories, Inc.）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明，在18.5μg/mL(該濃度遠(yuǎn)高于推薦用于電泳后染色的 約4μg/mL 的3X 染色液)濃度下，GelGreen沒有誘變性，而GelRed 也僅在S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。
GelRed 和GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。見圖3。
相反，SYBR?Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。由于已知SYBR Green I 對(duì)紫外線導(dǎo)致的突變有強(qiáng)烈的增強(qiáng)作用（Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)），因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時(shí)成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
圖1：GelRed 和EtBr預(yù)制膠染色（precast gel staining）對(duì)比圖。 瓊脂糖濃度為1%，緩沖液為TBE。四個(gè)泳道的加樣量從左至右分別為 200 ng, 100 ng, 50 ng and 25 ng。在300nm紫外燈下成像。結(jié)果顯示GelRed較EtBr有著更高的靈敏度和更低的本底色。
圖2. GelGreen （綠色）GelRed （紅色）在PBS 緩沖溶液中結(jié)合dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。
圖3：分別用1X SYBR Green 1、SYBR Safe、GelRed 和Gelgreen 在PBS 緩沖液中對(duì)Hela細(xì)胞染色5分鐘和30分鐘。成像結(jié)果表明Gelred和GelGreen染色劑幾乎沒有穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，而SYBR Green 1、SYBR Safe 則完全進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并與核酸結(jié)合（綠色發(fā)光部分）。這充分證明GelRed和GelGreen具有極好的安全性。更詳細(xì)的安全檢測(cè)報(bào)告可以到www.biotium.com 官方網(wǎng)站下載。
特 性:
1、高靈敏度
GelRedTM 和GelGreenTM 是目前最靈敏的凝膠核酸染料
2、穩(wěn)定性極好
可隨預(yù)制膠直接加熱而不會(huì)降解；室溫下可長期保存
3、更安全
艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠,其水溶性包裝產(chǎn)品通過美國環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)的安全測(cè)試
4、廣泛的適應(yīng)性
適用于預(yù)制凝膠染色和凝膠電泳后染色
5、染色過程簡單
預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解；電泳后染色也僅需30 分鐘，因本底色極低而無需脫色或沖洗
6、對(duì)DNA 和RNA 的遷移影響極小
對(duì)核酸遷移的影響小于SYBR Green I
7、與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)及可見光激發(fā)的觀察裝置完美兼容
使用312nm 激發(fā)的UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí)，GelRedTM 可以完美替代EB；使用254nm 激發(fā)的UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí)，GelGreenTM 足以替代任意一SYBR染料
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溫馨提示：不可用于臨床治療。