簡(jiǎn)單介紹:iTRAQ和TMT的技術(shù)原理一樣,所不同的是二者的分子結(jié)構(gòu)有差異。與SILAC相比(標(biāo)記蛋白質(zhì)),iTRAQ和TMT是對(duì)肽段進(jìn)行標(biāo)記的。依據(jù)iTRAQ/TMT標(biāo)簽的質(zhì)量數(shù)差異,通過MS實(shí)現(xiàn)對(duì)多組樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量:SILAC是通過上等MS( MSl)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,而iTRAQ/TMT是通過二級(jí)MS( MS/MS.MS2)進(jìn)行定量的jiTRAQ/TMT能兼容所有來源的蛋白質(zhì)樣品,并且能同時(shí)分析多達(dá)8-10組的樣品,分析通量高。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、分別提取蛋白質(zhì)并定量;2、Trypsin分別對(duì)蛋白進(jìn)行酶解,提取肽段;3、用不同質(zhì)量數(shù)的iTRAQ/TMT標(biāo)簽分別對(duì)肽段樣品進(jìn)行標(biāo)記:4、標(biāo)記完成后,混合樣品,用SCX進(jìn)行組分分離(15-20組分);5、對(duì)每個(gè)組分進(jìn)行LC-MS分析:6、蛋白質(zhì)鑒定與定量分析,篩選差異表達(dá)的蛋白;7、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證(Western blot,EUSA等):
技術(shù)優(yōu)勢(shì)1、高通量,能同時(shí)進(jìn)行多達(dá)8-10組樣品蛋白質(zhì)組的定性與定量分析;?2、兼容所有來源的樣品(動(dòng)植物組織、**、血液等);?3、實(shí)驗(yàn)周期短。 ?
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