General description

RNA的擴增需要將RNA底物轉(zhuǎn)換為DNA。這一反應(yīng)通過AMV RT（禽成髓細(xì)胞瘤病毒逆轉(zhuǎn)錄酶）或M-MuLV RT（莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶）等逆轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)。所獲得的cDNA可作為標(biāo)準(zhǔn)PCR的模板。
AMV RT合成cDNA鏈的起始位點，由所使用引物的類型決定：

• 使用oligo-p(dT)₁₅作為引物時，以poly（A) mRNA的3’端作為起始位點，
• 使用隨機引物p(dN)₆時，在mRNA模板的非特異性位點起始
• 使用序列特異性引物時，在特定位點起始。

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  使用AMV RT進行鏈cDNA合成具有某些優(yōu)勢。此酶比M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶具有更高的熱穩(wěn)定性，允許反應(yīng)在+42°C下進行，因而比+37°C的反應(yīng)條件具有更高的特異性和對二級結(jié)構(gòu)更好的解析能力。

  鏈cDNA合成試劑盒適用于鏈cDNA的合成反應(yīng)，這一反應(yīng)可作為兩步法RT-PCR實驗的起始步驟。本品能夠兼容序列特異性的引物，poly(dT)₁₅引物，或隨機引物。
  本試劑盒包含用于鏈合成的逆轉(zhuǎn)錄酶AMV，兩條不同的引物，我們的PCR核苷酸混合物（PCR Nucleotide Mix）與Neo pa RNA對照品。RT-PCR反應(yīng)生成的PCR產(chǎn)物可通過標(biāo)準(zhǔn)步驟實施分子克隆操作。