上海澤葉生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)和銷售于一體的生命科學實驗室產(chǎn)品創(chuàng)新性高科技企業(yè)。主要從事免疫學,重組蛋白,細胞因子,抗原/多肽/蛋白等產(chǎn)品主要包括免疫調節(jié)蛋白、白細胞介素、CSFs、生長因子、干擾素、Chemokines 、Adipokines 、TGF? / BMP Proteins、神經(jīng)因子、FGFs和TNF配體/受體防御因子等。并代理銷售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家國外知名品牌,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供一流的科研試劑和完善的技術服務。
一,抗體的鑒定
篩選雜交瘤細胞通過選擇性培養(yǎng)而獲得雜交細胞系中,僅少數(shù)能分泌針對免疫原的特異性抗體。一般在雜交瘤細胞布滿孔底1/10面積時,即可開始檢測特異性抗體,篩選出所需要的雜交瘤細胞系。
檢測抗體的方法應根據(jù)抗原的性質、抗體的類型不同,選擇不同的篩選方法,一般以快速、簡便、特異、敏感的方法為原則。
二,抗原修復
經(jīng)甲醛固定的部分組織細胞,因固定過程中可能會形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇,使免疫組化標記敏感性明顯降低,因此在染色前,有些抗原需進行修復或暴露。
抗原修復方法可分為化學方法和物理方法。化學方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制濃度與消化時間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時,浸泡切片的緩沖液的離子強度和pH、加熱的溫度和時間均影響著抗原修復效果。
1、pH的應用范圍及選擇
抗原修復液的pH非常重要,有效的抗原修復pH要比修復液的化學成分更重要,同樣的修復液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強,但pH范圍為6.0-10.0。目前大家公認的的抗原修復液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復液堿性pH的修復液要比酸性的有效,而對固定很長時間舊的存檔組織,酸性pH的修復液則優(yōu)于堿性的修復液。
2、抗原修復時應選擇溫度
70-90℃的溫度對未經(jīng)固定的蛋白質可發(fā)生變性,但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質,溫度必須達到92℃以上方能使其變性。研究結果顯示,溫度為92-98℃是合適的,95℃效果。
3、抗原修復液必須遵循自然降溫規(guī)律,否則效果不好或達不到抗原修復的目的
抗原修復持續(xù)時間過后,取出放于室溫中讓其慢慢地降溫,絕對不能為了爭取時間,強行用冰塊或冷水使其降溫。這是因為當高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結,要有一個自然環(huán)境讓其自然放松下來,隨著溫度的降低,它們會慢慢地恢復原來的形態(tài)和構型。
4、盡量使用足量的抗原修復液
應用于抗原修復的液體,一定要充足,防止切片干涸。應用大量的抗原修復液時,由于它的量較大,可延緩液體的沸騰時間,增加切片受微波輻射的量,對抗原修復將達到徹底。