上海澤葉生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)和銷售于一體的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品創(chuàng)新性高科技企業(yè)。主要從事免疫學(xué)，重組蛋白，細(xì)胞因子，抗原/多肽/蛋白等產(chǎn)品主要包括免疫調(diào)節(jié)蛋白、白細(xì)胞介素、CSFs、生長(zhǎng)因子、干擾素、Chemokines 、Adipokines 、TGF? / BMP Proteins、神經(jīng)因子、FGFs和TNF配體/受體防御因子等。并代理銷售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家國(guó)外知名品牌，致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供一流的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)。
一，抗體的鑒定
篩選雜交瘤細(xì)胞通過(guò)選擇性培養(yǎng)而獲得雜交細(xì)胞系中，僅少數(shù)能分泌針對(duì)免疫原的特異性抗體。一般在雜交瘤細(xì)胞布滿孔底1／10面積時(shí)，即可開(kāi)始檢測(cè)特異性抗體，篩選出所需要的雜交瘤細(xì)胞系?！?/span>
檢測(cè)抗體的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法，一般以快速、簡(jiǎn)便、特異、敏感的方法為原則。
二，抗原修復(fù)
經(jīng)甲醛固定的部分組織細(xì)胞，因固定過(guò)程中可能會(huì)形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇，使免疫組化標(biāo)記敏感性明顯降低，因此在染色前，有些抗原需進(jìn)行修復(fù)或暴露。
抗原修復(fù)方法可分為化學(xué)方法和物理方法。化學(xué)方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制濃度與消化時(shí)間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時(shí)，浸泡切片的緩沖液的離子強(qiáng)度和pH、加熱的溫度和時(shí)間均影響著抗原修復(fù)效果。
1、pH的應(yīng)用范圍及選擇
抗原修復(fù)液的pH非常重要，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要，同樣的修復(fù)液隨著pH的升高染色的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，但pH范圍為6.0-10.0。目前大家公認(rèn)的的抗原修復(fù)液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復(fù)液堿性pH的修復(fù)液要比酸性的有效，而對(duì)固定很長(zhǎng)時(shí)間舊的存檔組織，酸性pH的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液。
2、抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)選擇溫度
70-90℃的溫度對(duì)未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì)，溫度必須達(dá)到92℃以上方能使其變性。研究結(jié)果顯示，溫度為92-98℃是合適的，95℃效果。
3、抗原修復(fù)液必須遵循自然降溫規(guī)律，否則效果不好或達(dá)不到抗原修復(fù)的目的
抗原修復(fù)持續(xù)時(shí)間過(guò)后，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，絕對(duì)不能為了爭(zhēng)取時(shí)間，強(qiáng)行用冰塊或冷水使其降溫。這是因?yàn)楫?dāng)高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結(jié)，要有一個(gè)自然環(huán)境讓其自然放松下來(lái)，隨著溫度的降低，它們會(huì)慢慢地恢復(fù)原來(lái)的形態(tài)和構(gòu)型。
4、盡量使用足量的抗原修復(fù)液
應(yīng)用于抗原修復(fù)的液體，一定要充足，防止切片干涸。應(yīng)用大量的抗原修復(fù)液時(shí)，由于它的量較大，可延緩液體的沸騰時(shí)間，增加切片受微波輻射的量，對(duì)抗原修復(fù)將達(dá)到徹底。