實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

價(jià)格對(duì)比

產(chǎn)品描述

Biotool Vita-Orange細(xì)胞活性檢測(cè)試劑是一種氧化還原反應(yīng)的指示劑，在電子載體1-Methoxy PMS存在的條件下，利用活細(xì)胞中的脫氫酶催化四唑鹽WST-8生成甲臜染料（圖1），而且甲臜染料的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量成線性關(guān)系（圖2）。該試劑的靈敏度高于MTT、XTT、MTS或WST-1等其他四唑鹽。
Biotool Vita-Orange細(xì)胞活性檢測(cè)試劑為一瓶即開(kāi)即用的溶液，該試劑安全，無(wú)放射性，性?xún)r(jià)比高，為客戶(hù)提供方便、快速、可靠的使用體驗(yàn)。

圖1: Working mechanisms of Vita-Orange Cell Viability Reagent.

圖2: Cell number vs OD value using Biotool Vita-Orange Cell Viability Reagent. K562 and Hela cells were seeded into 96-well plate at different density in 100 μl culture medium in triplicate respectively. 16 hours later, 10 μl/well Vita-Orange Cell Viability Reagent were added, allowing to continuously culture for indicated duration in cell culture incubator. The absorbance at 450 nm were then measured in a microplate reader. Medium only wells were served as blank control. Note the great linear relationship between cell number per well versus OD450 values at all incubation time.

圖3: Time dependent color development using Biotool Vita-Orange Cell Viability Reagent. HEK293 cells were seeded into 96-well plate at different concentrations in 100 μl culture medium in triplicate. 16 hours later, 10 μl/well Vita-Orange Cell Viability Reagent were added, allowing to continuously culture for indicated duration in cell culture incubator. The absorbance at 450 nm were then measured in a microplate reader. Note the great linear relationship of color development versus incubation time at all cell concentrations.

應(yīng)用

??細(xì)胞增殖測(cè)定: Biotool Vita-Blue細(xì)胞活性檢測(cè)試劑具有水溶性、穩(wěn)定性好、無(wú)細(xì)胞毒性。
??細(xì)胞活力檢測(cè): 細(xì)胞代謝活力與染料產(chǎn)生隨細(xì)胞活力的變化而變化。
??細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn): 測(cè)定細(xì)胞因子誘導(dǎo)的增殖，恢復(fù)及擴(kuò)增細(xì)胞。
??細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn): 有毒的化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的死亡的細(xì)胞對(duì)該檢測(cè)中顏色的變化沒(méi)有影響，只有活細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)變顏色。Biotool Vita-Blue細(xì)胞活性檢測(cè)試劑本身無(wú)毒性，對(duì)細(xì)胞安全。

實(shí)驗(yàn)方法

需要的但不包括在該試劑盒中的實(shí)驗(yàn)器材

? 熒光計(jì)數(shù)器
? 多道移液器
? 3 % SDS（可選）

準(zhǔn)備細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶后使之貼壁并生長(zhǎng)4–24小時(shí)，然后開(kāi)始檢測(cè)。對(duì)于懸浮細(xì)胞，接種與培養(yǎng)瓶后可以立即檢測(cè)或24小時(shí)之內(nèi)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)步驟

可選步驟：用測(cè)試化合物處理細(xì)胞24-72小時(shí)后進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)。

1. 在細(xì)胞培養(yǎng)液中直接加入1/10體積的Biotool Vita-Blue細(xì)胞活性檢測(cè)試劑，充分混合，保證孔中藍(lán)色均一性，但避免氣泡產(chǎn)生。對(duì)96孔板，每100μl培養(yǎng)液加入10μl活性檢測(cè)試劑。
2. 于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5-4小時(shí)至顏色變?yōu)槌壬?yīng)避免過(guò)夜培養(yǎng)。
3. 用熒光計(jì)數(shù)器測(cè)量在450nm處的吸收光。一般的OD值在0.5-2.5之間，典型的在0.8-1.5之間。
注意: 在添加Vita-Orange細(xì)胞活性檢測(cè)試劑的細(xì)胞培養(yǎng)基中，在450nm處會(huì)有輕微的自發(fā)吸收值。該熒光背景隨培養(yǎng)基、pH值、培養(yǎng)時(shí)間、暴露于光線的時(shí)間等因素的變化而變化。典型的吸收值在孵育2小時(shí)后為0.1-0.2。為了糾正背景，準(zhǔn)備一個(gè)或多個(gè)無(wú)細(xì)胞的對(duì)照孔，計(jì)算其平均的熒光值，然后從試驗(yàn)孔中扣除該值。
4.?可選步驟：在100μl細(xì)胞中加入10 μl 3% SDS 以終止反應(yīng)，可在2天內(nèi)讀取熒光值。

實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)圖

防范措施

1. 使用前請(qǐng)充分混勻，避免反復(fù)凍融。
2. 如果長(zhǎng)時(shí)間孵育（過(guò)夜），請(qǐng)確保在試劑添加與孵育期間維持無(wú)菌狀態(tài)。細(xì)菌污染物能夠還原Biotool Vita-Orange細(xì)胞活性檢測(cè)試劑。
3. 在應(yīng)用Biotool Vita-Orange細(xì)胞活性檢測(cè)試劑之后，還可以做其他細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，如中性紅或結(jié)晶紫。
4. 確保包括合適的對(duì)照。

儲(chǔ)存條件

Biotool Vita-Orange細(xì)胞活性檢測(cè)試劑在避光條件下可在室溫保存6個(gè)月，2-8°C保存一年，-20°C及以下可保存更長(zhǎng)時(shí)間。