BT-474 [BT474]人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞（培養(yǎng)基：89%培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗）詳細(xì)說明書及細(xì)胞培養(yǎng)操作指南歡迎聯(lián)系我們。
發(fā)貨方式：
復(fù)蘇后發(fā)貨：我們復(fù)蘇細(xì)胞后發(fā)貨，貨期一周左右，免運(yùn)費(fèi)。（氣溫較好建議復(fù)蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運(yùn)輸）：需額外增加干冰運(yùn)費(fèi)，選擇干冰運(yùn)輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細(xì)胞，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）
細(xì)胞發(fā)貨采取專業(yè)的運(yùn)輸包裝，并選擇最快捷的運(yùn)輸方式（順豐速運(yùn)或其他空運(yùn)快遞）
本公司細(xì)胞引種來源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細(xì)胞庫、上海生化細(xì)胞所、中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會等

細(xì)胞處理方法：
一、貼壁細(xì)胞
1、 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時(shí)。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代，如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞，對50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞，如果細(xì)胞連片狀態(tài)，棄掉上清對收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。

二、懸浮細(xì)胞
1、接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。
5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞。
6、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細(xì)胞）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

華拓細(xì)胞培養(yǎng)操作指南

細(xì)胞常見問題：

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題分析

細(xì)胞在發(fā)貨前進(jìn)行質(zhì)檢：
1、細(xì)胞存種的活性檢測
2、細(xì)菌、真菌、霉菌污染物鏡檢
3、衣原體、支原體檢測（熒光法、培養(yǎng)法等）

產(chǎn)品質(zhì)量保證及售后：
1、 細(xì)胞為三代以內(nèi)，活體。運(yùn)輸過程中細(xì)胞出現(xiàn)污染和狀態(tài)不好，我們完全免費(fèi)重新發(fā)貨。
2、 實(shí)驗(yàn)過程中若確定是客戶問題，客戶僅需支付物流和耗材費(fèi)用，我們可重新發(fā)貨。其他根據(jù)情況靈活處理。
3、 產(chǎn)品使用過程中，華拓生物可提供技術(shù)上的指導(dǎo)。

細(xì)胞培養(yǎng)常見注意事項(xiàng)：
1、收貨時(shí)，如不能在收到細(xì)胞后及時(shí)操作處理細(xì)胞，T25及離心管發(fā)貨的細(xì)胞可以消毒后在培養(yǎng)箱過夜，干冰發(fā)貨的可以在確認(rèn)干冰未完全升華時(shí)將細(xì)胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升華，需即刻復(fù)蘇細(xì)胞；T25瓶及離心管發(fā)貨的細(xì)胞收貨后在37度培養(yǎng)箱平衡兩小時(shí)以上，再開始處理細(xì)胞，平衡是為了讓細(xì)胞盡快適應(yīng)培養(yǎng)箱環(huán)境。
2、貼壁細(xì)胞在消化時(shí)，因?yàn)槊總€(gè)客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣，不能完全規(guī)定消化時(shí)間，以科研人員經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。 對于消化這步，如果對該細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)不多，無法準(zhǔn)確掌控胰酶作用時(shí)間，建議可以按照下述操作：胰酶首先復(fù)溫到室溫后加入細(xì)胞，然后每隔30秒，即吹打下細(xì)胞，如果能夠吹打散細(xì)胞，加入完全培養(yǎng)基終止消化，把細(xì)胞打散后，離心去除胰酶加新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞接種 ，如果30秒吹打不下，再等30秒重復(fù)操作。注意消化時(shí)間，不要過度，細(xì)胞變圓可以吹下來即可終止。
3、傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細(xì)胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代；傳代后，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基，會有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)；細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長比較慢時(shí)，可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度；細(xì)胞碎片較多、背景較臟時(shí)，貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善；建議不要隨意更換培養(yǎng)基，因?qū)嶒?yàn)需要，可以逐步馴化，也可以聯(lián)系咨詢我們。
4、細(xì)胞凍存時(shí)，部分長得比較慢的細(xì)胞，凍存的細(xì)胞密度要稍微大點(diǎn)，以防止復(fù)蘇后生長困難；凍存液中含的DMSO請使用細(xì)胞級DMSO，同時(shí)濃度不要太高，部分細(xì)胞在10%DMSO條件下凍存會死亡，所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度；凍存時(shí)建議設(shè)置凍存檢測，即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細(xì)胞于一個(gè)凍存管中，與正常體積凍存的細(xì)胞共同凍存，至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果，凍檢合格前，留一部分細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，以防萬一；細(xì)胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則，即凍存時(shí)溫度不能急劇下降，應(yīng)控制溫度緩慢下降，復(fù)蘇時(shí)應(yīng)快速融化，融化后盡快加入培養(yǎng)基中。