名稱 Nuclear/Cytosol Fractionation Kit

規(guī)格 50T | 100T

存儲(chǔ) 提取液 2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期一年。

試劑組分 

Component 50 assay 100 assay

Extract Reagent A（提取液 A） 20mL 40mL

Nuclear Store Buffer B（核保存液 B） 10mL 20mL

Protease Inhibitor Cocktail（蛋白酶抑制劑混合物） 100μL 200μL

REMARK:

1、蛋白酶抑制劑混合物避免反復(fù)凍融。

2、如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

細(xì)胞核/胞漿分離試劑盒可以從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分離細(xì)胞核和胞漿組分。此試劑盒提供了一個(gè)系統(tǒng)，維持核和胞漿組分是分開和完整的。優(yōu)化的試劑配方和程序可以快速分離胞核和胞漿，而幾乎沒有交叉污染。

本試劑盒提取的胞核和胞漿組分仍保持其生化功能，適合下游分析如轉(zhuǎn)錄活性，RNA拼接，gel－shift 分析，報(bào)告分析，酶活性分析和 WB 等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

1)移液器、吸頭

2)離心機(jī)及離心管

3)渦旋振蕩器

4)冰箱，冰盒

注意事項(xiàng) 

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用。

2. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

6. 使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。

7. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

使用說明

1. 取 5-10×106 個(gè)細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整，每次的提取液用量并不是一定的，大約為細(xì)胞體積的 5-10倍即可，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整），在 4℃，500×g 條件下離心 2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

2. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清?！咀ⅰ吭?nbsp;4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘。

3. 在細(xì)胞沉淀中加入 400μl 冷的提取液 A，渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置冰上振蕩 30 分鐘。（沒有振蕩條件的話，也可冰上靜置，中間每隔 5 分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。）

4. 在 4℃，1200×g 條件下離心 5 分鐘。

5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到胞漿組分，請(qǐng)置冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

6. 沉淀用 PBS 洗滌一次，然后在 4℃，2000×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

7. 沉淀為細(xì)胞核組分，將沉淀用 200μL 保存液 B 重懸后保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。