名稱 Folin-Phenol 福林酚 福淋酚 酚試劑 / Folin & Ciocalteu’s Phenol Reagent

規(guī)格 50ML | 100ML

存儲 

4℃避光保存，有效期1年。

產(chǎn)品簡介 

1、Folin-酚試劑甲:（ 需客戶自備或者選用對應(yīng)的試劑盒）

將1g Na2CO3溶于50mL 0.2moL/L NaOH中，再把0.5g(硫酸銅)CuSO4·5H2O溶于100mL 1%的酒石酸鉀鈉(或酒石酸鈉)溶液，然后將前者50mL與后者1mL混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，此試劑只能使用一天，過期失效。

2、Folin-酚試劑乙:

本試劑的濃度為1moL/L，此為Folin-酚試劑應(yīng)用液。Folin-酚試劑平時(shí)應(yīng)密封貯存于4℃冰箱中避光保存。

福林酚常用于Lowry 方法進(jìn)行總蛋白定量

本試劑的濃度為1moL/L，此為Folin-酚試劑應(yīng)用液。Folin-酚試劑平時(shí)應(yīng)密封貯存于4℃冰箱中避光保存。

Folin -酚法測定原理：

在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)—銅絡(luò)合物。此絡(luò)合物將試劑磷鉬酸—磷鎢酸(FolIn試劑)還原，混合物深藍(lán)色(磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物)，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。此方法操作簡便，靈敏度比雙縮脲法高100倍，定量范圍為5～100μg蛋白質(zhì)。

操作方法：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：

取14支試管分成兩組，分別加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液(250μg/mL)，用水補(bǔ)足到1mL，加入5mL試劑甲，混勻，于20-25℃放置10分鐘，再加入0.5mL試劑乙，立即搖勻，在20-25℃保溫30分鐘，然后于500nm處比色。測定光密度值，取兩組測定的平均值，以蛋白質(zhì)濃度為橫座標(biāo)，光密度值為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線值為定量的依據(jù)。

2、樣品測定：

取1mL樣品溶液（約合20-250μg/多肽或蛋白質(zhì)）加入5mL試劑甲混勻，于20-25℃放置10分鐘，再加0.5mL試劑乙（Folin-酚），立即搖勻，在20-25℃保溫30分鐘，然后于500nm處比色，以1mL水代替樣品作空白對照。測定后，可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出未知樣品的濃度。若用0.5cm光程的比色杯進(jìn)行比色，可按下面方法進(jìn)行操作：取0.2mL樣品溶液（約含5-100μg多肽或蛋白質(zhì)）加入1mL試劑甲（可選用0.3-0.5cm直徑的小試管）混勻，10分鐘以后，再加入0.1mL試劑乙 ，立即混勻，30分鐘后比色。一般來說，若多肽或蛋白質(zhì)的濃度在2-25μg，測波長755nm,，而25μg以上則采用500nm比色為宜。

注意事項(xiàng)：

1、FolIn試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物，均有干擾作用。

2、福林酚僅在酸性條件下穩(wěn)定，所以加入試劑乙后要立即混勻，在試劑乙被破壞之前完成反應(yīng)，否則顯色程度減弱。

3、用該方法測定蛋白濃度會受到蛋白質(zhì)的特異性影響，即不同蛋白質(zhì)因絡(luò)氨酸、色氨酸含量的不同而使顯色強(qiáng)度稍有不同，標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式。

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