產品簡介

抗酒石酸酸性磷酸酶檢測試劑盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)檢測原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在堿性條件下p-nitrophenol呈黃色，產物黃色越深，說明酸性磷酸酶活性越高，反之則酶活性越低，通過分光光度比色法(酶標儀)測定吸光度，據此通過比色分析就可以計算出酸性磷酸酶活性水平。在適量的酒石酸存在的情況下進行酸性磷酸酶的活性檢測，檢測得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。該試劑盒可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

試劑組分：

自備材料：

1、PBS 或生理鹽水

2、離心管

3、水浴鍋或恒溫箱

4、96 孔板、酶標儀

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品：

①血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-20℃凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。

②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要可用 PBS 或生理鹽水進行適當勻漿，一般細胞數量在 10 6 以上，組織應在 100mg 以上，3000~4000g 離心取上清，-20℃凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。

③植物樣品：取適量的植物組織加入少量 PBS 或生理鹽水，充分搗碎或研磨，靜置 30min，用紗布或濾紙過濾，4000g 離心 20min，留取上清液并測量體積，-20℃凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用 ACP Assay buffer、PBS 或生理鹽水稀釋后再行檢測。

2、配制顯色工作液： 取出 1 支 pNPP，恢復至室溫后溶解于 2.5ml ACP Assay buffer，混勻，冰上預冷備用，新配制的顯色工作液應在 6h 內用完。

3、配制系列標準品：取出 p -nitrophenol(10mM)恢復至室溫，按 p -nitrophenol(10mM)：ACP Assay buffer=1：19 的比例混合，使?jié)舛冗_到 0.5mM，-20℃凍存?zhèn)溆?。按下表繼續(xù)稀釋：

4、TRAP 加樣：按按照下表設置空白孔、標準孔、空白孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的 TRAP 活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測能設置平行孔。

6、TRAP 測定：輕輕混勻，37℃孵育 25～30min，每孔加入 160μl Stopping Solution 終止反應。以空白調零，酶標儀測定 405nm 處標準管、測定管的吸光度。

計算：

計算： 酸性磷酸酶活性單位的定義：在 pH4.8 37℃條件下，每分鐘水解 para-nitrophenyl phosphate 顯色底物產生 1 微摩爾 p -nitrophenol 所需的酸性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位。根據酶活性定義，計算出樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。系列標準品(1~6 號)濃度(即 p -nitrophenol 含量)50、100、200、300、400、500μ

M 為橫坐標，以對應的標準孔吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，根據測定孔的吸光度在標準曲線上查得待測樣品的含量。

注意事項：

1、待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、如果待測樣品體積較少，可減少樣品加樣量，以 ACP Assay buffer 補至 30μl。

3、如果無法檢測 405nm，亦可檢測 400～415nm 范圍內吸光度。

4、建議每次測定時都作標準曲線，以使標準更準確，另外標準品避免反復凍融。

5、如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色杯的最小檢測體積，盡量采用小體積的比色杯。

6、所測樣品的含量高于標準曲線的上限，應用 ACP Assay buffer 稀釋樣品后重新測定。

7、配制 1 支顯色工作液后應當日用完，因此請注意適當多準備一些樣品一起檢測。

8、p -nitrophenol 溶液對人體有害，反應終止液有腐蝕性，請小心操作。

9、如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應時應精確計時，此時推薦采用孵育 30min或更長時間，以減小操作過程中的時間誤差。

10、待測樣品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至 30min。

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