名稱 DNA退火緩沖液(5×) / Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)
規(guī)格
PH1417-1 | 1mL
試劑組分
試劑(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----1ml----Store at -20℃
試劑(B): Nuclease-Free Water----5ml----Store at RT
產(chǎn)品簡介
DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing Buffer for DNA Oligos)簡稱為DNA退火緩沖液，是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液，可用于常規(guī)的DNA oligo的退火，尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。
Phygene的 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。該本試劑操作簡單，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR儀上進(jìn)行程序降溫，約90min即可完成。
使用說明
操作步驟(僅供參考)：
1、 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的超純水或Nuclease-Free Water配制成50μM， 同時溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混勻備用。
2、 按如下退火反應(yīng)體系操作：
Nuclease-Free Water----40μl
Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----20μl
DNA oligo A(50μM)----20μl
DNA oligo B(50μM)----20μl
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Tatal 100μl
按照上述順序，依次加入并混勻，如果所用PCR儀沒有加熱蓋，可加入Mineral Oil防止 液體揮發(fā)。
3、 按如下PCR儀的退火條件：
步驟 溫度 時間 作用
1 95℃ 2min Oligo充分變性
2 每90s下降1℃,降至25℃ 約90min 程序退火
3 4℃ 長期保存 暫時存放
注1：如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能，也可以設(shè)置為每90秒下降1℃。
4、退火后可直接用于連接反應(yīng)，也可以-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進(jìn)行酶切等其它反應(yīng)，用純化試劑盒進(jìn)行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過5%，以避免Annealing Buffer對后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。
注意事項
1、 避免反復(fù)凍融，以免效率下降。
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