D-Luciferin 是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，對(duì)螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠光進(jìn)行催化。該反應(yīng)產(chǎn)生的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值，當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^(guò)量時(shí)，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子篩選的常用報(bào)告基因?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)實(shí)際上是無(wú)背景的，使得 luc 報(bào)告基因成為檢測(cè)低水平基因表達(dá)的理想選擇。在標(biāo)準(zhǔn)熒光計(jì)數(shù)儀中可以可靠地測(cè)量到 0.02 pg 的熒光素酶。除了用于基因表達(dá)的外，熒光素酶還用于 ATP 的檢測(cè)。MCE提供螢火蟲(chóng)熒光素酶 (HY-P1004) 、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B) 

    1. 操作前注意事項(xiàng)
a) D-Luciferin 在 100 mM 的水性緩沖液 (pH 6.1-6.5) 中易于溶解。儲(chǔ)備溶液可在不含 ATP 的水中制成，并儲(chǔ)存在 -20℃ 的溫度下，以防光線照射。游離酸必須用適當(dāng)?shù)膲A中和以溶解。在較高的 pH 值下，熒光素經(jīng)歷堿催化的脫氫脲醛生成，以及外消旋成L-異構(gòu)體。
b) D-Luciferin 可用于任何現(xiàn)有的報(bào)告基因檢測(cè)或 ATP 檢測(cè)系統(tǒng)。
c) 如果檢測(cè) ATP，需要戴手套和使用不含 ATP 的容器，盡量減少所有可能的 ATP 污染源。只使用無(wú)菌的不含 ATP 的水和試劑。所有試劑制劑使用蒸壓水。
2. 實(shí)驗(yàn)操作
此說(shuō)明僅提供實(shí)驗(yàn)參考，具體實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)您的具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更改。
2.1 體外成像實(shí)驗(yàn)示例
a) 在無(wú)菌水中制備100 mM (100-200X) 熒光素儲(chǔ)備溶液 拌勻。立即使用或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲(chǔ)存，避免凍融循環(huán)，避免暴露在陽(yáng)光下。
b) 在預(yù)熱過(guò)的組織培養(yǎng)液中配制 0.5-1 mM D-Luciferin 工作液
c) 除去細(xì)胞中的培養(yǎng)基。
d) 在細(xì)胞中加入 D-Luciferin 工作液，成像前 37℃ 孵育細(xì)胞 5-10 分鐘。
2.2 體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)示例
a) 在 DPBS 中制備 15 mg/mL 熒光素儲(chǔ)備溶液，不含 Mg²⁺ 和 Ca²⁺ 拌勻。
b) 過(guò)濾器通過(guò) 0.2μm 過(guò)濾器對(duì)溶液進(jìn)行滅菌。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲(chǔ)存，避免凍融循環(huán)，避免暴露在陽(yáng)光下。
c) 成像前 10-15 分鐘，以 150 mg/kg (或 10 μL/g 熒光素儲(chǔ)備溶液) 的動(dòng)物體重腹腔注射 D-Luciferin。
注：應(yīng)為每個(gè)動(dòng)物模型進(jìn)行 D-Luciferin 動(dòng)力學(xué)研究，以確定峰值信號(hào)時(shí)間。
2.3 基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)示例
a) 在無(wú)菌水中制備100 mM 熒光素儲(chǔ)備溶液。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲(chǔ)存，避免凍融循環(huán)，避免暴露在陽(yáng)光下。
b) 在 25 mM tricine 緩沖液 (pH 7.8) 中制備含有 3 mM ATP、1 mM DTT 和 15 mM MgSO₄ 的 1 mM D-Luciferin 工作溶液。
c) 用移液管將 5-10 μL 細(xì)胞裂解液移到微孔板中。使用不含裂解物的裂解試劑或緩沖液作為空白對(duì)照。
d) 根據(jù)說(shuō)明，使用熒光素工作溶液為光度計(jì)注入底部。
e) 立即注入 200 μL D-Luciferin工作溶液，結(jié)合時(shí)間為10秒。