產(chǎn)品簡介: 細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使 PS 暴露在細(xì)胞膜外表面。PS 是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使 PS 暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V 具有易于結(jié)合到磷脂類如 PS 的特性,對 PS 有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的 PS。PS 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所獨(dú)特的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就破壞了。因此,可以采用 AnnexinV 與PI 雙染的方法,通過流式檢測細(xì)胞早期凋亡。
操作步驟: 標(biāo)記的 Annexin V 可結(jié)合流式細(xì)胞儀用于檢測細(xì)胞外膜上的磷酯酰絲氨酸 1.用去離子水按 1:4 稀釋結(jié)合緩沖液(4ml 結(jié)合緩沖液+12ml 去離子水); 2.用 4℃預(yù)冷的 PBS 洗細(xì)胞兩次,用 250ul 結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1× 106/ml; 3.取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/Alexa Fluor 647 和 10μl 20ug/ml的碘化丙錠溶液; 4. 混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘; 5. 在反應(yīng)管中加 400μl PBS,流式細(xì)胞儀(FACS)分析
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