DNA鏈熒光染色。
DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。
DAPI的激發(fā)波長(zhǎng)為340nm,發(fā)射波長(zhǎng)為488nm;DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后,激發(fā)波長(zhǎng)為364nm,發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。
本DAPI溶液用水配制,加熱有助于溶解。
用于細(xì)胞核染色時(shí),推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/ml。
運(yùn)輸與保存方法 常溫運(yùn)輸。粉末在室溫下穩(wěn)定,需避光儲(chǔ)存。 注意事項(xiàng) 1)DAPI對(duì)人體有一定刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。 2)熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。 3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。 4)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 配制母液 用雙蒸水溶解,終濃度為1mg/ml。本產(chǎn)品不可以用緩沖液直接溶解。-20℃可保存1年,建議分裝保存,避免反復(fù)凍融。 使用方法 1.配制工作液:用雙蒸水或PBS稀釋母液,配制成所需要的工作的濃度(0.5-10μg/ml)。 2.固定的細(xì)胞或組織染色: 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色,則直接進(jìn)行DAPI?染色。 a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片:加入適量DAPI染色液,覆蓋住樣品即可。 對(duì)于懸浮細(xì)胞:至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液,混勻。室溫放置3-5分鐘。 b)吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。 c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360nm,發(fā)射波長(zhǎng)460nm。 3.?活細(xì)胞或組織染色: a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液,約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液,對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。 b)在?37℃培養(yǎng)細(xì)胞?10~20?分鐘。 c)用?PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360nm,發(fā)射波長(zhǎng)460nm。
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