細(xì)胞內(nèi)PH值在許多細(xì)胞生命活動中發(fā)揮著重要作用，例如細(xì)胞生長，鈣離子的調(diào)控，胞吞作用，趨化性，細(xì)胞粘合和其它細(xì)胞活動。BCECF被廣泛地用于細(xì)胞內(nèi)pH的測定。Tsien博士和其他人通過加入2個額外的羧化物基團(tuán)改進(jìn)了這種羧基熒光素。加入的兩個羧基使得它能更好地被固定在細(xì)胞內(nèi)。BCECF具有很好的水溶性，是因?yàn)樗谥行詐H時帶有4到5個負(fù)電荷。但是BCECF卻很難穿過細(xì)胞膜進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)。它的pKa值為6.97，高于其它的羧基熒光素。BCECF在激發(fā)光譜439 nm處有等吸收點(diǎn)，因此它能和Fura 2一樣可用比率法測定。505 nm和439 nm通常是非常有用的用于比率測量的波長，一般會將490 nm和450 nm的濾光片加在激發(fā)光源的前面。而530 nm的濾光片則是用來查看它的熒光信號的。這里要注意的是，激發(fā)光譜與吸收光譜有一些細(xì)微的區(qū)別。