注意事項: 1. 膜再生液實質是在不影響膜上結合的抗原的條件下將抗體洗脫下來,實際操作中,膜類型、抗體類型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度。 2. 適用于 ECL 和類似的化學發(fā)光試劑進行的 Western 檢測。不適用于非化學發(fā)光試劑進行的 Western檢測,例如 DAB,NBT/BCIP。 3. 用 ECL 顯色后,再生液洗脫幾分鐘后,可再次加入 ECL 顯色液顯影,如膠片上顯示條帶,表明抗體未除凈,須進一步在再生液中浸泡,至膠片上無顯色。 4. 使用脫脂奶粉封閉的膜要比使用 BSA 封閉的膜更容易再生。 5. 盡量避免讓膜干燥。
在遇到一抗二抗去除效果欠佳時,可以考慮適當延長一抗二抗去除液的孵育時間,同時確保孵育時的溫度不低于20℃。溫度過低時一抗二抗的去除效果會下降。同時也可以考慮嘗試其它的一抗二抗去除液,以摸索出的適合您實驗條件的Western一抗二抗去除液。
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