即用型GUS染色液
產(chǎn)品簡介
GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細(xì)菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標(biāo)記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。
即用型GUS染色液又稱β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒 (β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit) 簡稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應(yīng)條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點，可用肉眼或顯微鏡觀察到。GUS染色液可用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細(xì)胞的組織化學(xué)染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)分析，該即用型試劑比常規(guī)GUS染色液操作簡便。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：①70%乙醇；②去離子水；③小瓶或多孔板、顯微鏡；
貯存和效期：
未配制的試劑盒按照溫度貯存，有效期至少1年。
配制好的 X-gluc 溶液-20℃避光保存 30 天，長期-80℃保存；GUS 染色緩沖液 4℃貯存；GUS染色工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以-20℃保存 2-3 天。
使用方法
1、配置 X-Gluc Solution（50×）：取1mL X-Gluc Solution完全加至1支X-Gluc中，全部溶解，即獲得X-Gluc Solution（50×）。配置好的X-Gluc Solution（50×）可存放于-20℃保存，1個月有效。
2、配制X-Gluc染色工作液：取適量的X-Gluc Solution(50x)和GUS Buffer，按1:49比例充分混勻，配制成X-Gluc染色工作液，如取0.2ml X-Gluc Solution(50x) 加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色工作液，該染色工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以4℃保存3天。
3、取材：將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片，可放于離心管中。
注：用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如，擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預(yù)處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片（1-3mm）。當(dāng)操作大的組織和樣品時，可以選用真空滲入法來幫助底物滲入細(xì)胞。取適量待染葉片等組織加入適量GUS染色液，使GUS染色液完全浸沒組織。
4、取適量待染葉片等組織加入適量GUS染色工作液，使GUS染色工作液完全浸沒組織。37℃孵育1~24小時，隨著孵育時間的延長，藍(lán)色漸漸出現(xiàn)，當(dāng)表達(dá)量較高時，GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點。亦可用錫箔紙包好后搖床搖動 10 分鐘或更長時間至材料出現(xiàn)藍(lán)色。注意要做陰性和陽性對照實驗。
5、用70%乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒于乙醇1~3小時，至陰性對照呈白色。如有必要可重復(fù)該脫色步驟，以便徹底清除葉綠素。樣本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光學(xué)顯微鏡下觀察，白色背景上的藍(lán)色即為GUS表達(dá)位點。GUS 染色陽性的藍(lán)色斑點很穩(wěn)定，在酒精中不褪色。
6、一般染色后，GUS 染色陽性的藍(lán)色斑點肉眼就能看到。但是有些材料可能藍(lán)色斑點很細(xì)微，要在顯微鏡下才能看到。
注意事項
X-Gluc Solution(50x)應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則染色效率會下降。
The GUS reporter system (GUS: β-glucuronidase) is a reporter gene system, particularly useful in plant molecular biology and microbiology. Several kinds of GUS reporter gene assay are available, depending on the substrate used. The term GUS staining refers to the most common of these, a histochemical technique.
The purpose of this technique is to analyze the activity of a promoter (in terms of expression of a gene under that promoter) either in a quantitative way or through visualization of its activity in different tissues. The technique is based on β-glucuronidase, an enzyme from the bacterium Escherichia coli; this enzyme, when incubated with some specific colorless or non-fluorescent substrates, can transform them into coloured or fluorescent products.
Reference: Jefferson, R. (1987) Plant Mol. Biol. Reporter, 5:387-405.
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