特別提示：包括2×SYBR Green PCR Mastermix在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：2×SYBR Green PCR Mastermix
產(chǎn)品貨號：QN0949
產(chǎn)品規(guī)格：50T|200T

本產(chǎn)品為應用SYBR Green Ⅰ染料進行Realtime PCR擴增反應的高效預混系統(tǒng)。該預混系統(tǒng)提供了經(jīng)過優(yōu) 化的緩沖液、dNTP、HotStart Taq DNA 聚合酶、SYBR Green I染料和MgCl2，使用者只需加入適量的引物、 模板和水，即可進行熒光定量PCR檢測。 該預混系統(tǒng)中的優(yōu)化緩沖液和 HotStart Taq DNA 聚合酶等可大大提高 PCR 產(chǎn)物的靈敏度和特異性。 Realtime PCR MasterMix 采用高效 HotStart Taq DNA 聚合酶，使 PCR 反應具有更高靈敏度和特異性。 本產(chǎn)品可用于熒光 PCR 檢測，獲得靈敏、準確且可靠的結果?？蛇m合任意熒光定量 PCR 儀，如 ABI7000/7700/7900HT/7300/7500 Realtime PCR System、FTC2000、lightcycler 等。

產(chǎn)品特點：
高特異性：本產(chǎn)品采用熱啟動 DNA 聚合酶，90℃以上2min后具有擴增活性，可大大提高PCR產(chǎn)物的特異性。
高靈敏度：本產(chǎn)品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測低拷貝數(shù)的模板，且重復性好。
高適用性：本產(chǎn)品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。

應用實例：模版：提取RNA，反轉錄成cDNA，模版稀釋倍數(shù)102﹑103﹑104﹑105，設計的引物擴增的目的片段長度是125bp。

儲存條件：-20℃

除了2×SYBR Green PCR Mastermix,，我公司還供應以下相關產(chǎn)品：



名稱：即用型熒光定量RT-PCR試劑盒
貨號：BTN101219
規(guī)格：50次
本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測的即用型雙酶一管式RT-PCR試劑盒，可以對靶片段進行實時定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料DNAgreen等所有一管式實時定量RT-PCR所需要的成分，用戶只需加入RNA模板和引物即可進行實時定量RT-PCR反應，具有廣泛的用途。

產(chǎn)品特點：
1.一管式完成qRT-PCR反應，避免樣品交叉污染，尤其適合臨床應用。
2. 即開即用，用戶不需要單獨準備qRT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix)，將加樣步驟減少到zuì低，極大降低了加樣誤差，增加了可重復性。
4. 使用范圍廣，適用于從病毒RNA到人RNA的各種RNA模板。
5.高靈敏度，每個RT-PCR體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子，可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
雙酶一管式qRT-PCR Buffer，2×	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。

使用方法：
1.在一干凈的無RNase的PCR管中，先加入下列成分(下面只列出樣品管的設置情況，用戶可自己根據(jù)需要設置陽性和陰性對照)：

成分	樣品
自備RNA模板(分下面三種情況)	見下
總RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或體外轉錄得到的專一RNA	0.01pg-500ng
RNA特異性引物一(自備)	終濃度300nM(注1)
RNA特異性引物二(自備)	終濃度300nM
RNase-free水	補到10μL
雙酶一管式qRT-PCR Buffer(2×)	15μl
自備ROX(某些熒光PCR機型需要)	3μL(注2)
MMLV-Taq Mix	2μl

?注1：通常初次使用本試劑時，可用引物濃度300nM進行實驗，根據(jù)實驗結果具體情況，在200～800nM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整，同時增減RNase-free水用量，保證總反應體積不變即可。
?注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三種型號的熒光PCR儀器，則需用自備的ROX進行Ct值校正。對ABI 7700和7900，ROX的zuì佳濃度為1×(即在每30μl反應體系中加3μl 10×ROX)。對ABI 7500，ROX的zuì佳濃度為0.05-0.1×(每30μL反應體系加0.3μL 10×ROX；也可將10×ROX稀釋到1×，然后每個反應體系加入3μL 1×ROX)。ROX會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。對于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型號的熒光PCR儀器，ROX不是必須的，但加入的話也不會影響整個PCR分析。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR儀中進行熒光定量RT-PCR。
3. 設定RT-PCR反應條件時，一般將RT的條件設定成42℃ 30分鐘，后接94℃變性5分鐘，然后進入PCR循環(huán)(PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm值和PCR產(chǎn)物長度由用戶自行決定注)、zuì后72℃ 5分鐘。并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結合DNA時，zuì大吸收光譜在471nm，結合DNA時的zuì大吸收光譜在500nm，zuì大發(fā)射光譜在530nm。