??????碧云天的Human Insulin ELISA Kit (Human Insulin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人胰島素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Insulin的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為1.54mIU/L，與人的C肽、Proinsulin、IGF-I、IGF-II和大鼠胰島素、小鼠胰島素等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，與豬、綿羊和牛的胰島素分別有37.4%、48%和31%的交叉反應(yīng)性。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????胰島素(Insulin)是一種肽類(lèi)激素，屬于Insulin-like蛋白家族，該家族還包括胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGFs)、松弛肽和其他Insulin-like多肽。胰島素主要由胰島B細(xì)胞產(chǎn)生，主要調(diào)控葡萄糖代謝，維持能量平衡。Insulin分泌異常會(huì)導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生，糖尿病主要分為兩類(lèi)：一型糖尿病(T1D，胰島素依賴)和二型糖尿病(T2D，胰島素非依賴性)。T1D主要是由于胰島B細(xì)胞無(wú)法正常分泌胰島素所導(dǎo)致，而T2D則是由于胰島素抵抗所引起。糖尿病的并發(fā)癥主要包括心臟病、中風(fēng)、高血壓、失明、腎臟疾病和神經(jīng)病。在美國(guó)，糖尿病已成為了第七大致死疾病。
??????胰島素體內(nèi)合成時(shí)首先合成含有信號(hào)肽的前蛋白質(zhì)原，信號(hào)肽被剪切后得到86個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的前胰島素原，在經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的酶切作用后得到33個(gè)氨基酸的B鏈、21個(gè)氨基酸的A鏈以及34個(gè)氨基酸的C鏈。成熟的人胰島素是由A鏈和B鏈經(jīng)由二硫鍵連接所形成的異質(zhì)二聚體，與豬胰島素和犬胰島素具有99%的氨基酸同源性，與牛胰島素具有94%的氨基酸同源性，與小鼠、大鼠、貓及綿羊的胰島素具有92%的氨基酸同源性。胰島素以Zn2⁺結(jié)合的六聚體形式儲(chǔ)存于胰島B細(xì)胞中，分泌時(shí)以不含Zn2⁺的單體結(jié)構(gòu)分泌至肝門(mén)靜脈血管中，以實(shí)現(xiàn)在肝臟中的富集。胰島素能夠持續(xù)分泌使?jié)舛染S持在一個(gè)基礎(chǔ)水平，進(jìn)食后，胰島B細(xì)胞將會(huì)分泌大量的胰島素，控制血糖。
??????胰島素受體(Ins R)是一種酪氨酸激酶受體，在所有細(xì)胞中都有不同程度的表達(dá)。胰島素通過(guò)與兩分子受體結(jié)合并形成三聚體實(shí)現(xiàn)信號(hào)傳遞。受體與胰島素結(jié)合后，可以增加靶細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取。Ins R主要存在兩種形式,同源二聚體和與IGF-I受體形成的異源二聚體。這兩種形式的受體都能與胰島素、IGF-I、IGF-II結(jié)合，只是親和力有所不同。胰島素、IGF-I和IGF-II的濃度及細(xì)胞表面受體的表達(dá)數(shù)量均能影響并調(diào)控胰島素信號(hào)通路的激活。
??????胰島素的信號(hào)通路較為復(fù)雜，主要是胰島素與受體結(jié)合從而激活PI3K-AKT信號(hào)通路。Insulin的信號(hào)通路參見(jiàn)圖1。

圖1. Insulin的信號(hào)通路示意圖。

??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人Insulin的濃度，其原理見(jiàn)圖2。人Insulin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人Insulin會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記人Insulin抗體后，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記人Insulin抗體與人Insulin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人Insulin濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人Insulin濃度。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
??????TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
??????加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。