??????碧云天的Human IL-8 ELISA Kit (Human Interleukin-8 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素8酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-8的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為5.58pg/ml，與人GR0、IP-10、MIP-1、MCP-1、MCP-2、MCP-3、I-309、小鼠KC等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-8即白細(xì)胞介素-8(簡(jiǎn)稱白介8)，又稱趨化因子CXCL8，曾被命名為粒細(xì)胞趨化肽(GCP-1)和中性粒細(xì)胞激活肽(NAP-1)，是一種分子量在8-9kDa的肝素結(jié)合多肽，屬于CXC細(xì)胞因子家族。人CXC細(xì)胞因子家族中大多都具有3-β-折疊/1-α-螺旋結(jié)構(gòu)，在N端具有保守的谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELR)序列。在體內(nèi)，IL-8主要以三種形式存在：?jiǎn)误w、同源二聚體及與CXCL4/PF4組成的異源二聚體，其中IL-8單體活性最強(qiáng)。成熟的人IL-8與犬、貓及豬的IL-8具有65-69%的氨基酸同源性，在嚙齒類(lèi)動(dòng)物中并不存在編碼IL-8的基因。
??????G蛋白偶聯(lián)受體CXCR1/IL-8RA和CXCR2/IL-8RB參與調(diào)解IL-8的功能活性。CXCR1分子量在45-50kDa之間，特異性識(shí)別IL-8，而CXCR2分子量在35-40kDa之間，幾乎能夠識(shí)別所有的CXC細(xì)胞因子。在IL-8濃度較低時(shí)，CXCR2即可與之結(jié)合，二者結(jié)合后主要調(diào)控細(xì)胞趨藥性和促進(jìn)MMP-9分泌。相反地，CXCR1只有在IL-8濃度較高時(shí)才能與之結(jié)合，結(jié)合后主要調(diào)控細(xì)胞的呼吸爆發(fā)和磷脂酶D2的激活過(guò)程。阻斷CXCR2受體會(huì)導(dǎo)致白細(xì)胞粘附在活化的血管內(nèi)皮處并向炎癥部位遷移，而阻斷CXCR1受體則會(huì)使得中性粒細(xì)胞的抗菌活性增強(qiáng)。另外，IL-8還能夠與絲氨酸蛋白酶抑制劑A1/α-1抗胰蛋白酶形成復(fù)合物，從而阻止IL-8與CXCR1的結(jié)合。
??????除了促炎外，IL-8還參與新生血管生成以及癌癥和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過(guò)程。IL-8能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞上VEGF的表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，從而促進(jìn)新生血管生成。在動(dòng)脈粥樣硬化部位和心肌梗死患者的血液及腦脊液中IL-8濃度水平均有所上升。IL-8還能促進(jìn)EMT過(guò)程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。
??????IL-8與CXCR1/2結(jié)合后，G蛋白偶聯(lián)受體被激活，隨后Gα亞基和Gβγ亞基分離，進(jìn)而活化下游Ras-Raf-MEK-Erk,JNK1/c-JUN和p38信號(hào)通路。同時(shí)活化的G蛋白還能夠誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)快速Ca²⁺通道激活，抑制腺苷酸環(huán)化酶的活性，從而導(dǎo)致cAMP濃度降低。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人IL-8的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人IL-8特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-8會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-8抗體后，生物素化抗人IL-8抗體與人IL-8結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人IL-8濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
??????TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
??????加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。