??????碧云天的Mouse IL-4 ELISA Kit (Mouse Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白細胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，最小檢出量為4.5pg/ml，與人IL-4、IL-4 sR等均沒有交叉反應，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-4即白細胞介素-4(簡稱白介4)，又名B細胞刺激因子-1，其分子量大約在18-20kDa，在免疫應答中具有多種效應功能。成熟的小鼠IL-4是由140個氨基酸減掉20個氨基酸的信號肽所剩余的120個氨基酸組成。該細胞因子N端包含3個潛在的糖基化位點，能夠形成3個鏈內(nèi)二硫鍵，最終形成4-α螺旋結(jié)構(gòu)。成熟的小鼠IL-4分別與人IL-4和大鼠IL-4具有43%和63%的氨基酸同源性，三者之間并無交叉反應性。Th2細胞、嗜堿性粒細胞、肥大細胞、NKT、γδT細胞和嗜酸性粒細胞均能夠分泌IL-4。
??????IL-4能夠促進細胞的增殖和存活，促進小鼠B細胞表面免疫球蛋白的轉(zhuǎn)化，引發(fā)肥大細胞嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞的趨藥性，誘導CD4⁺細胞向Th2表型分化，還能促進上皮細胞的增殖和活化。在腫瘤免疫中，IL-4也發(fā)揮了重要作用。在早起實驗中研究者發(fā)現(xiàn)IL-4展現(xiàn)出了強大的抗腫瘤能力，這可能是由于IL-4具有抗血管生成能力和激活CD8⁺ T細胞的能力。然而，新的研究結(jié)果卻表明IL-4是一種腫瘤促進分子，這一結(jié)果可能是因為在IL-4的作用下，腫瘤細胞內(nèi)抗凋亡分子表達上升，同時IL-4作用于腫瘤相關巨噬細胞，誘導組織蛋白酶的分泌，促使腫瘤細胞發(fā)生遷移。
??????IL-4首先與IL-4 Rα亞基結(jié)合，隨后該復合物與輔助受體鏈γ_c或IL-13 Rα結(jié)合。在JAK的作用下，受體C端發(fā)生磷酸化，隨后形成二聚體。這一過程導致STAT6被募集并發(fā)生磷酸化，磷酸化的STAT6發(fā)生構(gòu)象改變，形成二聚體，隨后轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)，對多種靶基因的轉(zhuǎn)錄進行調(diào)控激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠IL-4的濃度，其原理見圖1。小鼠IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠IL-4會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗小鼠IL-4抗體后，生物素化抗小鼠IL-4抗體與小鼠IL-4結(jié)合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠IL-4濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。
注意事項：
??????由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。