??????碧云天的NA-Green (Nucleic Acid Green，核酸綠)是一種EB (Ethidium bromide，溴化乙錠)的升級換代產(chǎn)品，用于凝膠中DNA、RNA等核酸的染色。NA-Green具有安全(未檢測到致突變性和細胞毒性)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，凝膠中的核酸在使用本產(chǎn)品后經(jīng)約500nm波長藍光(也可以使用約260nm紫外光)激發(fā)呈現(xiàn)綠色熒光，適用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold為核酸染料的凝膠成像和檢測系統(tǒng)。
??????由于NA-Green在500nm左右處有的激發(fā)波長，可以使用對人體無害的藍光燈或藍光成像儀進行核酸檢測，從而避免常規(guī)的紫外檢測對核酸樣品的致突變性，以及紫外對人的眼睛和皮膚的傷害。特別在切膠回收時，使用NA-Green并用藍光燈具有很大的優(yōu)勢，不僅可以避免核酸樣品的突變，也可以避免紫外光對人體的傷害。
??????NA-Green比EB或SYBR Green更安全。NA-Green在遠高于其工作濃度范圍時均沒有細胞毒性及誘變性。艾姆斯氏試驗(Ames test)結(jié)果表明，即使在S9代謝活化時，也沒有檢測到致突變性。NA-Green和碧云天另外一種安全型核酸染料NA-Red，由于它們特殊的化學結(jié)構(gòu)使其難以進入細胞，從而大大降低甚至避免了染料的致突變性和細胞毒性。艾姆斯氏試驗結(jié)果表明，NA-Green比NA-Red更安全，即便在S9代謝活化時，當NA-Green濃度高達約20微克/毫升時，也沒有檢測到致突變性。而SYBR Green染料可以穿透細胞膜，進入活細胞并染色DNA。并且有報道SYBR Green可以強烈增強紫外線誘導的基因突變。
??????NA-Green檢測靈敏度高，對于小分子量核酸的染色效果好。NA-Green的檢測靈敏度比EB高8-10倍，在檢測低濃度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其對小分子量的DNA檢測非常靈敏。在使用浸泡染色法時，NA-Green和SYBR Gold的靈敏度相近甚至更高；與SYBR Gold不同的是，NA-Green預先配制在凝膠中也有很高的靈敏度。EB對于小分子量核酸染色效果差，而NA-Green對于小分子量核酸的染色效果很好，便于觀察酶切或PCR獲得的小分子量核酸片段。本說明書推薦使用的NA-Green濃度，其檢測效果略優(yōu)于EB。如果希望獲得更高的染色靈敏度，可以適當提高NA-Green的工作濃度。
??????NA-Green的穩(wěn)定性好，染色重復性高。含SYBR Green的凝膠核酸染色的重復性比較差，這通常是由于SYBR系列染料的穩(wěn)定性差導致的。而NA-Green的穩(wěn)定性很好，可以室溫長時間保存及使用微波爐加熱。NA-Green的光穩(wěn)定性良好，可以在室內(nèi)正常光線下操作而無需避光。由于其熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，含NA-Green的凝膠在核酸染色時的重復性非常好。
??????NA-Green可以使用和SYBR Green或EB相同的檢測體系。NA-Green具有和SYBR Green或SYBR Gold幾乎相同的光學性質(zhì)，兩者的激發(fā)光和發(fā)射光都非常接近，這樣可以直接用NA-Green替換SYBR Green，以使用SYBR Green的凝膠觀察、拍照或成像系統(tǒng)(約500nm激發(fā))。對于原來用于EB染料觀察的系統(tǒng)，可以考慮選用碧云天的NA-Red染料來替代EB，但也可以使用沒有致突變性的NA-Green來替代EB。使用NA-Green來替代EB，并且用EB的紫外檢測體系時，檢測靈敏度會比使用NA-Red低約4-5倍。對于既可以觀察EB也可以觀察SYBR Green的具有紫外和藍光兩種激發(fā)光的凝膠成像系統(tǒng)，則推薦直接用NA-Green來替換EB。NA-Green的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考圖1。

圖1. NA-Green的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

??????NA-Green的使用方法和EB一致。NA-Green可以按適當比例直接加入瓊脂糖中配制成凝膠，也可以在電泳完畢后對凝膠進行染色。前者更加方便，而后者靈敏度要更加高一些。但由于NA-Green本身已經(jīng)非常靈敏，通常采用把NA-Green直接配制在凝膠中就可以了。對于一些特殊的情況，如核酸樣品量特別少的情況等，則可以考慮電泳后再對凝膠進行染色。
??????NA-Green對于核酸的遷移率影響非常小，小于SYBR Green對于核酸遷移率的影響。
??????通過凝膠回收試劑盒(如碧云天或Qiagen的凝膠回收試劑盒)或酚氯仿抽提，可以有效去除與DNA或RNA結(jié)合的NA-Green，從而確保不會影響后續(xù)的連接、酶切、PCR、測序等常規(guī)的分子生物學用途。
包裝清單：

保存條件：
??????室溫避光保存，至少一年有效。
注意事項：
??????為確保使用的不是假冒的NA-Green，可以用細胞培養(yǎng)液把NA-Green稀釋至1X，然后對培養(yǎng)的活細胞進行染色。隨后在熒光顯微鏡下嘗試用各種激發(fā)光觀察，如果發(fā)現(xiàn)活細胞細胞核出現(xiàn)明顯的熒光，則可以判定為假冒產(chǎn)品。如果各種激發(fā)光下活細胞均無熒光，則說明該核酸染料是不能進入活細胞的相對安全的染料。具有強致突變性的吖啶橙(Acridine Orange)染色核酸后也呈現(xiàn)綠色熒光，但其可以染色活細胞，而NA-Green不會染色活細胞。
??????使用藍光燈來檢測NA-Green染色的核酸膠時，需要注意避免使用一些實為紫外燈的假冒偽劣的藍光燈，以減少紫外線對于核酸樣品和人體的傷害。比較簡單的判斷方法是，對于EB或NA-Red染色的核酸膠，藍光燈照射后是不會出現(xiàn)熒光條帶的，而僅對于NA-Green染色的核酸膠，藍光燈照射后才會出現(xiàn)熒光條帶。如果對于EB或NA-Red染色的核酸膠照射后也能觀察到熒光條帶，則說明使用的藍光燈實際為紫外燈。
??????NA-Green和EB一樣作為熒光染料均需避光保存，但在使用過程中的常規(guī)室內(nèi)光照不會影響其使用效果。
??????制備好的NA-Green瓊脂糖凝膠，在4℃避光條件下通?？梢员４?-5天。
??????NA-Green瓊脂糖凝膠再次熔化使用時，為取得更好的觀察效果，需要添加適量NA-Green。
??????電泳之后的凝膠不建議重復使用。
??????電泳后再使用NA-Green染色的凝膠一般不需要脫色，如果發(fā)現(xiàn)背景太高，可以使用不含核酸酶的水進行脫色處理。
??????NA-Green和NA-Red除了可以染色雙鏈DNA外，也可染色單鏈DNA和RNA。NA-Red對單鏈核酸的染色靈敏度約為對雙鏈DNA染色靈敏度的一半。NA-Red對單鏈核酸的染色靈敏度約為NA-Green的5倍。
??????如果使用聚丙烯酰胺凝膠，請使用浸泡染色法染膠，并延長染色時間至30分鐘-1小時。
??????如果觀察到條帶彌散或者分離不理想，建議使用浸泡染色法染色以確認是否與染料有關。如果浸泡染色法染色后仍然出現(xiàn)類似的問題，說明與染料無關，請嘗試以下方法：使用新鮮配制的電泳緩沖液、降低核酸的上樣量、降低染料的濃度、降低瓊脂糖濃度、選用更長的凝膠、降低電泳電壓一倍以上并延長凝膠電泳時間以改善電泳效果、使用更薄的梳齒等。
??????本產(chǎn)品兼容常用的電泳緩沖液，例如TAE和TBE。
??????NA-Green適用于約500nm或260nm激發(fā)的成像系統(tǒng)，如果使用普通的適用于NA-Red或EB的紫外燈或成像系統(tǒng)(約300nm激發(fā))，也能較好地觀察到熒光，但強度會略弱一些。
??????NA-Green不屬于有毒有害物質(zhì)，并通過了環(huán)境安全相關測試，相關廢棄物無需特殊處理，可參考常規(guī)化學試劑進行處理。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。