大鼠心肌細胞提取物大鼠心肌細胞提取物是從大鼠原代心肌細胞提取的,大鼠原代心肌細胞從正常大鼠心臟組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5% PMSF,-80度保存。 潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。 細胞傳代: 大鼠心肌細胞提取物1. 顯微鏡下觀察細胞,神經(jīng)干細胞懸浮成“神經(jīng)球”生長,通常情況下,每兩天換液一次,每四天傳代一次。 2. 在生物安全柜或者超凈臺中,將培養(yǎng)瓶中的含有神經(jīng)球的培養(yǎng)基轉移到15ml離心管中。 3. 500rpm離心5分鐘,收集神經(jīng)干細胞。 4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶,在超凈工作臺中輕輕吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是縮小神經(jīng)球的體積,不要消化能單個神經(jīng)干細胞,那樣會影響其生長速度。 5. 然后加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后1000rpm 離心5分鐘。 6. 離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,按照1:2-1:3的比例進行細胞傳代培養(yǎng)。
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