小鼠甲狀腺上皮細胞提取物

甲狀腺是人體的內(nèi)分泌腺。棕紅色，分左右兩葉，中間相連，呈“H”形。甲狀腺濾泡是甲狀腺的基本結(jié)構(gòu)單位，濾泡外周是一層排列整齊的上皮細胞，甲狀腺上皮細胞是甲狀腺激素合成和釋放的部位，濾泡腔內(nèi)充滿均勻的膠性物質(zhì)，是甲狀腺激素復(fù)合物，也是甲狀腺激素的貯存庫。同時，上皮細胞具有強大的吸收碘化物的能力。甲狀腺體活動減弱時，上皮細胞呈扁平狀。

基因組DNA制備：采用酶解法裂解細胞，利用硅膠膜離心柱特異地吸附DNA，去除蛋白質(zhì)、鹽類、脂類等雜質(zhì)，有效地保持基因組DNA的完整性。提取的DNA適用于酶切、PCR、Southern Blot等實驗。
    總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化?？道噬锾峁┑目俁NA樣品附有RNA樣品OD值、濃度、總含量等。
    cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及2μg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的質(zhì)控分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
    microRNA制備:采用具有超強的裂解能力和抽提靈敏度microRNA試劑盒制備，結(jié)合試劑盒采用的特殊吸附膜，大大增加了小分子RNA的吸附力，獲得的microRNA純度好，得率高，可以直接用于各種下游實驗，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。
    蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl,1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備細胞蛋白裂解液，離心去除細胞碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
    細胞沉淀制備：首先分離培養(yǎng)出高質(zhì)量的原代細胞，然后經(jīng)平衡鹽溶液清洗去除細胞表面雜質(zhì)，最后用合適的裂解液裂解細胞并離心獲得細胞沉淀。