"SW1116細胞：人結腸癌細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

SW1116 Cell

細胞形態(tài)特性：上皮細胞

2611-61-2

我?？吹揭粋€比較復雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是次聽說，應該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數(shù)非常怪異的細胞才需要這么復雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個視細胞而定。如果和標準形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會對你越來越不好；比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化)，就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次最多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

SW1116細胞：人結腸癌細胞

細胞生長特性：貼壁生長

KYSE-410細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：食管鱗癌；男性

769-P細胞系；細胞傳代方法：1：4—1：12傳代，2—3天換液一次；細胞形態(tài)特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：該細胞系1975年建系，源自一位63歲白人女性的初期透明細胞腺癌組織，細胞呈圓形且邊界不清，核漿比大，有微絨毛及橋粒。該細胞可在軟瓊脂上生長。 

GA-10(Clone4)細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

HIMEC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腸微血管內(nèi)皮細胞

HL7702[L02]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：肝

【細胞培養(yǎng)中支原體、黑蛟蟲、真菌的污染情況總結】支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度；黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率；真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

NB-4細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：急性早幼粒細胞白血病；女性

MT-4細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：淋巴母細胞樣；圓形；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

A10細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：主動脈平滑??；自發(fā)永生；BDIX

NCI-H250[H250]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

LOVO細胞系；細胞傳代方法：1：3傳代，2-3天換液一次；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：LoVo建自1971年，從診斷為結腸腺癌的56歲男性白人的一個轉(zhuǎn)移到左鎖骨上區(qū)的腫瘤結節(jié)建系。癌基因Ｃ-myc,K-ras,H-ras,N-ras,Myb,sis和fos的表達呈陽性。癌基因N-myc的表達未做檢測。它在裸鼠中能成瘤。與107細胞聯(lián)合皮下接種５只裸鼠21天后全部成瘤。表達腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白蛋白CC-3和CC-4。

SW948[SW-948]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

SW1116細胞：人結腸癌細胞

細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系

細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：傳代培養(yǎng)：是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞，可根據(jù)不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。實驗步驟：①入無菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手；②倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預熱；③超凈臺臺面應整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔；④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右，關閉紫外燈，打開風機清潔空氣除去臭氧；⑤點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)；⑥將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上；⑦倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2的進入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱；⑩對懸浮培養(yǎng)細胞，步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。

細胞背景資料：CSAp陰性(CSAp-)。 結腸抗原3，陰性。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 癌基因c-myc, K-ras, H-ras, myb, sis 和fos的表達呈陽性。 未檢測到癌基因N-myc和N-ras的表達。 表達腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白CC-4，CC-5和CC-６。

SW1116細胞：人結腸癌細胞

細胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內(nèi)可長滿。

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：1)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細胞懸液接種1)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液；3)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；4)計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；2)消毒動物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細胞；3)接種腹水瘤細胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>