"HT-1376細胞：人膀胱癌細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

HT-1376 Cell

細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書

59483-54-4

常規(guī)的細胞實驗(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話(難消化細胞例外)。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求極高。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果10min還消化不徹底的話)，而應該想其它辦法；PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。

HT-1376細胞：人膀胱癌細胞

細胞生長特性：貼壁生長

SNU-182細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

TMD8細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：彌漫大B淋巴瘤；男性

HUTU-80細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：每個細胞上蛙皮素受體的位點多達6000個。

RH30[RC13,RMS13,SJRH30]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：肺泡橫紋肌肉瘤；骨髓轉(zhuǎn)移

Kuffer細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

【細胞培養(yǎng)中原蟲的污染情況總結】原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環(huán)。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細胞)，37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(酸鏈霉素和芐青霉素)。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。1)孵箱應定期用三氧機消毒或者紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應是三蒸水；2)超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素；3)超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染；4)無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的噴灑中和，約幾小時即可進入操作。

HEK293細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

EL4EL4細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：EL4是從用9,10-二甲基-1,2-并蒽在C57BL小鼠中誘導的淋巴瘤中建立的。 能抗0.1 mM 化可的松，對20 mcg/ml PHA敏感。 還有一個亞株(EL4.IL-2, ATCC TIB-181)可以生成高水平的IL-2。 檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

Hep 3B2.1-7[Hep 3B,Hep-3B,Hep3B]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

FRTL-5細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：甲狀腺；自發(fā)永生；Fischer

NCI-H716[H716]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

TT細胞系；細胞傳代方法：1：3-1：4傳代，每周換液2次；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：TT細胞由LeongSS等，自一位77歲白人女性甲狀腺髓樣癌患者的穿刺活檢樣本中建立。TT細胞持續(xù)產(chǎn)生高水平的降血素和CEA。更換培養(yǎng)基后24h和72h，在培養(yǎng)基中檢測到的免疫活性的降血素濃度分別為3900pg/106個細胞和7700pg/106個細胞。72小時后CEA積累濃度超過27ng/106個細胞；該細胞最初是在RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，可產(chǎn)生神經(jīng)肽，但還不知道在F12培養(yǎng)液中培養(yǎng)是否會產(chǎn)生。

HT-1376細胞：人膀胱癌細胞

細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計時，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

HT-1376細胞：人膀胱癌細胞

細胞傳代方法：1：2傳代

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：1)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細胞懸液接種1)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液；3)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；4)計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；2)消毒動物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細胞；3)接種腹水瘤細胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>