"RN-c細(xì)胞：大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

RN-c Cell

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

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很多朋友討論細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，見(jiàn)到很多很好的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，這里說(shuō)一些我個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)，因?yàn)橐恍┍容^特殊的原因，我自己培養(yǎng)接觸過(guò)近300種細(xì)胞，常用于做實(shí)驗(yàn)的，累積有百余種，可以說(shuō)遇到過(guò)許多各式各樣古怪的細(xì)胞。這里挑細(xì)胞消化開(kāi)始做我的篇專題，并不是因?yàn)榧?xì)胞消化最重要，而是近期看到大家頻繁討論這個(gè)話題，我就拋磚引玉，下面幾點(diǎn)拙見(jiàn)，可能與其它朋友總結(jié)的一些經(jīng)驗(yàn)有點(diǎn)出入，僅供大家參考。許多同學(xué)對(duì)細(xì)胞消化做了許多研究，得出了很多有價(jià)值的經(jīng)驗(yàn)，也見(jiàn)到很多人的困惑。其實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，就能把細(xì)胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細(xì)節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識(shí)，如果不對(duì)之處，歡迎指正，總結(jié)下來(lái)，細(xì)胞培養(yǎng)中消化很重要，但其實(shí)消化并不是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵所在(雖然很重要)，關(guān)鍵所在是細(xì)胞來(lái)源，血清質(zhì)量和水源(自己配制溶液的話)。我看到版上許多人養(yǎng)細(xì)胞遇到各種各樣的問(wèn)題，很多時(shí)候bottleneck沒(méi)有找到，雖然通過(guò)其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因?yàn)槿藗兺⒁庾约旱牟僮鳎傆X(jué)得自己沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)，而忽視試劑，溶液尤其是細(xì)胞的質(zhì)量，后者其實(shí)才是許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的問(wèn)題。

RN-c細(xì)胞：大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分

SH-SY5Y細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：據(jù)報(bào)道，該細(xì)胞的密度可高達(dá)1×106cells/cm2，具有中等水平的多巴胺β羥化酶的活性。

SK-N-DZ細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

GCT0404細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：骨巨細(xì)胞瘤

HRC-99細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

KYSE70細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：5傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

接收細(xì)胞相關(guān)問(wèn)題：如不能在收到細(xì)胞后及時(shí)操作細(xì)胞，T25及離心管發(fā)貨的細(xì)胞將可以消毒后在37度過(guò)夜，血清發(fā)貨的細(xì)胞在室溫下靜置1-2天(注意不要放冰箱)，干冰發(fā)貨的可以在確認(rèn)干冰未完全升華時(shí)將細(xì)胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升華，請(qǐng)即刻復(fù)蘇細(xì)胞。T25瓶及離心管在培養(yǎng)箱平衡是為了讓細(xì)胞盡快適應(yīng)培養(yǎng)箱環(huán)境，同時(shí)使部分因運(yùn)輸導(dǎo)致脫落的細(xì)胞貼壁，此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細(xì)胞，可以收集上清后離心(1200rpm，5min)后，將沉淀用新的培養(yǎng)基重懸后接種至新的培養(yǎng)瓶或皿中。部分細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中，由于不斷震蕩及環(huán)境不適，可能導(dǎo)致細(xì)胞破碎死亡，從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細(xì)胞碎片及顆粒狀物質(zhì)。這種情況下，平衡后，貼壁細(xì)胞用PBS洗兩遍再加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可；懸浮細(xì)胞可以離心(1000rpm，3min)收集細(xì)胞，并用PBS重懸后再離心一次，再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細(xì)胞。

NCI-H295R[H295R]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

SNU-620細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

A-172細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

NCI-H1993細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2—1：6傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

BIU-87細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

OCI-LY7細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸??；細(xì)胞背景資料：彌漫大B淋巴瘤；男性

RN-c細(xì)胞：大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

購(gòu)買細(xì)胞注意事項(xiàng)：1)收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系；2)仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等；3)用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次；4)建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通交流?！炯?xì)胞傳代操作步驟】一、貼壁細(xì)胞傳代：1)提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)；2)吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞；3)加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用；4)用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡；5)將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。二、懸浮細(xì)胞傳代：1)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min；2)棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液；3)將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

RN-c細(xì)胞：大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細(xì)胞懸液接種1)無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液；3)培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍；4)計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細(xì)胞)。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；2)消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細(xì)胞；3)接種腹水瘤細(xì)胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>