"NRK細胞：大鼠腎細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

NRK Cell

細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書

111721-75-6

細胞傳代培養(yǎng)(消化法)標準操作規(guī)程【原理】細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶?！静牧虾驮噭?)無菌生理緩沖液(PBS)；2)胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分裝于15 ml無菌離心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回溫；3)新鮮培養(yǎng)基；4)無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶【傳代前準備操作】1)預熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱；2)用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手；3)正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染；4)點燃酒精燈：注意火焰不能太?。?)準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶；6)取出預熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)；7)從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞：注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞；8)打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

NRK細胞：大鼠腎細胞

細胞生長特性：貼壁

HuH-28細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：肝內(nèi)膽管癌

MCF-12F細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：乳腺上皮細胞；女性

QSG-7701細胞系；細胞傳代方法：消化3-5分鐘，1：2,3天內(nèi)可長滿；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：該細胞系來自35歲女性的肝癌癌旁組織。

IMCD3細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腎；內(nèi)髓集合管；上皮細胞

MFM-223細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

解凍細胞出現(xiàn)大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：1)冷凍時細胞密度過低：推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后，立即將凍存管浸入在37℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉移到預熱的培養(yǎng)基中；2)不適當?shù)睦鋬鲞^程：推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當?shù)募夹g，并確保使用了適量和適合的冷凍液。出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：1)培養(yǎng)瓶的大?。阂话憬鉀Q方案是一些細胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉移到較小的培養(yǎng)瓶中，使細胞密度上升；如，根據(jù)培養(yǎng)基的體積，從T75培養(yǎng)瓶轉移到2或3個T25培養(yǎng)瓶中；2)細胞密度過低：通常解決方案是提高未來冷凍物種細胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個試管來進行培養(yǎng)。

HFLS-OA細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：滑膜；關節(jié)炎成纖維細胞

AMJ2-C8細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：巨噬細胞；J2病毒轉化；C57BL/6J

MFE-280細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

CCD-33Co細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

CL187/CCL187細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

RGE細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腎小球；內(nèi)皮細胞

NRK細胞：大鼠腎細胞

細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系

細胞培養(yǎng)無菌操作的演示：凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精燈火焰操作。器皿使用前必須過火滅菌，繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處，使用時仍要過火。各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自來水刷洗，除去灰塵。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀中12小時以除去臟物、鉛、等物。刷洗、烘干：12小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清潔液浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次，最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙(油光紙)包裝。高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關和安全閥，當蒸氣成直線上升時，關閉安全閥，當指針指向15磅時，維持20-30分鐘。高壓消毒后烘干。二、舊的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過來蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液(酸液)，12小時后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗(避免蛋白質干涸后粘附于玻璃上難以清洗)，再用蒸餾水沖洗3次。烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝。

細胞背景資料：腎；自發(fā)永生；Osborne-Mendel

NRK細胞：大鼠腎細胞

細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經(jīng)驗可以和大家分享一下：1)不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高)，其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更徹底，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈；2)不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長；3)不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞完全變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時的機械應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。

PIEC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：髖動脈；內(nèi)皮細胞

OUMS-23細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

HT1080細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：這株細胞含有活化的N-ras癌基因。

MA-891細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

hADSCs細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：脂肪間充質干細胞

KE-37細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：急性T淋巴細胞白血?。荒行?/div>