"COLO-679細(xì)胞：人黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

COLO-679 Cell

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

120728-10-1

【胰蛋白酶消化操作】1)加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗(沖洗)，加入適量消化液(胰蛋白酶液)，注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，消化溫度是37℃；2)顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度；(3)吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液?！敬荡蚍稚⒓?xì)胞操作】1)吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液；2)吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中；3)平衡離心：平衡后將離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘；4)棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液?！痉盅b稀釋細(xì)胞操作】1)顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計(jì)數(shù)。注意密度過(guò)小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。最后要做好標(biāo)記；2)分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2～3個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋；3)繼續(xù)培養(yǎng)：用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2小時(shí)后開(kāi)始貼附在瓶壁上。

COLO-679細(xì)胞：人黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)　

AV 12細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：8-1：20傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

GM12878細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸?。患?xì)胞背景資料：B淋巴細(xì)胞；EBV轉(zhuǎn)化；女性

hBMSCs細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：骨肉瘤；女性

RPMI8226細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

解凍細(xì)胞出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：1)冷凍時(shí)細(xì)胞密度過(guò)低：推薦的解決方案：縮短解凍過(guò)程中的時(shí)間。將細(xì)胞取出后，立即將凍存管浸入在37℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉(zhuǎn)移到預(yù)熱的培養(yǎng)基中；2)不適當(dāng)?shù)睦鋬鲞^(guò)程：推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過(guò)程中采用的適當(dāng)?shù)募夹g(shù)，并確保使用了適量和適合的冷凍液。出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：1)培養(yǎng)瓶的大小：一般解決方案是一些細(xì)胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶中，使細(xì)胞密度上升；如，根據(jù)培養(yǎng)基的體積，從T75培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到2或3個(gè)T25培養(yǎng)瓶中；2)細(xì)胞密度過(guò)低：通常解決方案是提高未來(lái)冷凍物種細(xì)胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個(gè)試管來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)。

3T3swiss細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

MHCC97細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

4-1ST細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：胃癌；女性

IPEC-1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：小腸；上皮細(xì)胞；自發(fā)永生

IEC-6[IEC6]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

HuUMSCs-11細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：第三代

COLO-679細(xì)胞：人黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇：細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。【凍存細(xì)胞】1)選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染)，在凍存前1d換液；2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×10／ml左右密度，離心，去上清；3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外；4)分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液；5)旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記；6)凍存：在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩?fù)蘇細(xì)胞】1)從罐中取出凍存管；2)迅速放入36℃～37℃水浴，不時(shí)搖動(dòng)，使其急速融化，30～60s內(nèi)完成；3)凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開(kāi)蓋子，用吸管將細(xì)胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養(yǎng)液；4)低速離心(500～1000r／min) 5min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；5)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng)。凍存細(xì)胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達(dá)到10／ml，在融后稀釋20倍時(shí)，仍能保持5×10／ml數(shù)量。

細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

COLO-679細(xì)胞：人黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：1：2傳代

傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細(xì)胞懸液接種1)無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液；3)培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍；4)計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細(xì)胞)。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；2)消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細(xì)胞；3)接種腹水瘤細(xì)胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>