化學(xué)名

3-[[6-(3-aminophenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl]oxy]phenol

簡(jiǎn)稱

TWS119

別名

TWS 119, TWS-119

中文名

N/A

化學(xué)式

C₁₈H₁₄N₄O₂

分子量

318.33

CAS號(hào)

601514-19-6

純度

98%

溶劑/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO64mg/ml; Ethanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.57ml DMSO，或者每3.18mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF2771-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

TWS119是一種GSK-3β抑制劑，在無細(xì)胞試驗(yàn)中IC50為30nM；能夠誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的分化，并且有助于干細(xì)胞生物學(xué)的研究。

信號(hào)通路

PI3K/Akt/mTOR; Stem Cells & Wnt

靶點(diǎn)

GSK-3β

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IC50

30nM

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體外研究

使用1μM TWS119處理P19細(xì)胞，使30-40%細(xì)胞進(jìn)行分化，尤其分化為神經(jīng)細(xì)胞譜，根據(jù)正確的神經(jīng)元形態(tài)(通過標(biāo)準(zhǔn)EB形成法，且伴隨著TWS119處理，產(chǎn)生60%神經(jīng)分化)計(jì)數(shù)TuJ1陽性細(xì)胞。TWS119與GSK-3β(KD=126nM)緊密結(jié)合，通過表面等離子共振(SPR)量化，IC50為30nM。TWS119作用于小鼠胚胎癌和ES 細(xì)胞，有效誘導(dǎo)神經(jīng)分化。TWS119處理肝星狀細(xì)胞(HSC)，降低β-catenin磷酸化，誘導(dǎo)β-catenin核易位，提高谷氨酰胺合成酶產(chǎn)量，阻礙平滑肌肌動(dòng)蛋白和Wnt5a合成，但促進(jìn)膠質(zhì)蛋白酸性蛋白，Wnt10b和成對(duì)的同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子2c的表達(dá)。TWS119觸發(fā)β-catenin的迅速累積，增強(qiáng)與寡核苷酸(含Tcf和Lef結(jié)合的DNA序列)的核蛋白相互作用，且大幅上調(diào)Tcf7、Lef1和其他Wnt靶點(diǎn)基因包括Jun、Ezd7(編碼Frizzled-7)、Nlk(編碼Nemo樣激酶)。TWS119 提高T細(xì)胞特定殺傷力和與保護(hù)IL-2的產(chǎn)生能力相關(guān)的IFN-g釋放。最新研究顯示TWS119處理多克隆活化人類T細(xì)胞，誘導(dǎo)Wnt信號(hào)。與表達(dá)CD45RO(+)CD62L(-)效應(yīng)表型的對(duì)照激活T細(xì)胞相比，這些T細(xì)胞具有天然CD45RA(+)CD62L(+)表型，這種作用存在TWS119劑量依賴性。

體內(nèi)研究

TWS119按30mg/kg計(jì)量處理細(xì)胞表面，細(xì)胞表達(dá)低水平CD44和高水平CD62L。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

N/A

酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

方法

在BIAcore S51儀器上在25℃下在PBS buffer中測(cè)量SPR。GSK-3β-GST融合蛋白的相對(duì)光單位(11000-17000)通過EDC[1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺]耦合程序固定在S系列CM5生物傳感器芯片上。GSK-3β稀釋到溫和酸性緩沖液(10mM KAc, pH 5.0)中，然后在濃度為20-200μg/ml時(shí)注射到傳感芯片(事先使用EDC(0.2M)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS, 0.05M)的1:1混合物溫育7分鐘激活)中，注射7分鐘。最后，通過注射7分鐘乙醇胺(1M, pH 8.5)，而阻斷生物傳感器矩陣的未反應(yīng)位點(diǎn)。隨后,注射TWS119 90秒，濃度不斷提高(0、2、4、8、16、32、62.5、125、250、500和1000nM), 隨后300秒，GSK-3β-TWS119復(fù)合物解離。使用S51評(píng)價(jià)軟件包對(duì)SPR進(jìn)行測(cè)評(píng)。在四種不同表面進(jìn)行兩組獨(dú)立滴定實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)值，取平均。假設(shè) 1:1結(jié)合模型，用于測(cè)定熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)結(jié)合系數(shù)。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)

濃度

N/A

處理時(shí)間

4小時(shí)和48小時(shí)

方法

使用酶連續(xù)灌注而分離雄性Wistar大鼠(體重為500-600g)肝星狀細(xì)胞，通Nycodenz密度梯度離心而富集。由于其高脂肪含量，HSC富集在梯度離心的上層。HSC培養(yǎng)在含10% FCS，100U/ml青霉素和100g/ml鏈霉親和素的DMEM培養(yǎng)基中。細(xì)胞按1000000個(gè)(HSC 7d)和2000000個(gè)(HSC 1d)的密度接種在每個(gè)培養(yǎng)皿(直徑6cm)中。HSC培養(yǎng)1和7天，然后使用TWS119處理。使用DMSO制備10mM TWS119儲(chǔ)存液。對(duì)照組用DMSO單獨(dú)處理。在無血清條件下，加入TWS119 4小時(shí)和48小時(shí)。在實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中只加入血清，測(cè)定HSC的DNA合成。然后進(jìn)行western blot分析，免疫熒光染色和RT-PCR，用于測(cè)量生物學(xué)變化。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

Pmel-1 TCR-轉(zhuǎn)基因小鼠和pmel-1 ly5.1雙轉(zhuǎn)基因小鼠和pmel-1 Thy1.1雙轉(zhuǎn)基因小鼠

配制

TWS119溶于DMSO

劑量

30mg/kg

給藥方式

腹腔注射

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

SF2771-10mM

TWS119 (GSK-3抑制劑)

10mM×0.2ml

SF2771-5mg

TWS119 (GSK-3抑制劑)

5mg

SF2771-25mg

TWS119 (GSK-3抑制劑)

25mg

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說明書

1份