培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基:DMEM/F12+10%FBS
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%
溫度:37℃
細胞描述
細胞名稱:人臍帶間充質(zhì)干細胞
細胞數(shù)量:1×106個
細胞活力: >90%
代數(shù):p1-p3代
細胞檢測: 細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
細胞凍存:液氮凍存(DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO)
細胞運輸:干冰運輸(凍存細胞)
細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
細胞傳代方法
顯微鏡下觀察細胞,當(dāng)覆蓋80%底面積時,進行細胞傳代。注意不要等到細胞覆蓋100%的時候才傳代,那樣細胞容易老化。
在生物安全柜或者超凈臺中,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中
用PBS或者生理鹽水洗一遍
加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘
然后取出細胞,加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后,轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,1000rpm 離心5分鐘
離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,按照1:3的比例進行細胞傳代培養(yǎng)。
細胞復(fù)蘇方法
細胞在收到后,如果不是立刻進行實驗,轉(zhuǎn)移到液氮中保存。如果立刻實驗,細胞在37℃水浴迅速解凍,在3分鐘內(nèi)完成。
超凈臺中準(zhǔn)備15ml離心管一支,裝入10ml培養(yǎng)基,然后用移液器將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中,輕輕吹打均勻。
1200轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘后收集細胞
棄去上清,再加入5ml DMEM/F12+10%FBS完全培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)入T-25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),進行后續(xù)的實驗。
關(guān)鍵字: 間充質(zhì)干細胞-臍帶
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