描述: 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程?;钚匝鯔z測(cè)試劑盒(Reactive oxygen species assay kit)采用DCFH-DA探針檢測(cè)活性氧。DCFH-DA是迄今為止最常用、最靈敏的細(xì)胞內(nèi)活性氧檢探針。本身沒有熒光的DCFH-DA可穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,在胞內(nèi)轉(zhuǎn)化生成DCFH。在活性氧存在的條件下,DCFH被氧化生成熒光物質(zhì)DCF,綠色熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)活性氧水平成正比。在激發(fā)波長(zhǎng)502 nm,發(fā)射波長(zhǎng)530 nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)DCF 熒光,從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。 DCFH-DA活性氧檢測(cè)系統(tǒng)本底低,靈敏度高,線性范圍寬,使用方便。需要下列等熒光檢測(cè)設(shè)備之一:熒光顯微鏡、熒光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀。激發(fā)波長(zhǎng)500 ± 15 nm,發(fā)射波長(zhǎng)530 ± 20 nm,或者按照FITC熒光檢測(cè)條件檢測(cè)。 組成與儲(chǔ)存:可以測(cè)定100-500個(gè)樣品 (1) 0.1 ml 10 mM DCFH-DA in DMSO,-20 ºC保存。 (2) 1 ml活性氧陽性對(duì)照,4 ºC保存。
使用活性氧檢測(cè)試劑盒(Reactive oxygen species assay kit,#C1300)顯示CHO細(xì)胞內(nèi)活性氧熒光。左圖:正常CHO細(xì)胞;右圖:CHO細(xì)胞用試劑盒配備的活性氧陽性對(duì)照處理。綠色熒光表明細(xì)胞活性氧急劇增加,并能顯示其定位。
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