??????碧云天的蛋白酶抑制劑混合物(細(xì)菌抽提用, 100X) (Protease inhibitor cocktail for bacterial cell extracts, 100X) 是一種用于細(xì)菌蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物(23mM AEBSF, 2mM Bestatin, 0.3mM E64 and 2mM Pepstatin A in DMSO),并提供獨(dú)立包裝的0.1M EDTA。 ??????細(xì)菌提取物中含有許多內(nèi)源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易導(dǎo)致提取物中的蛋白降解或去修飾,從而影響后續(xù)的蛋白檢測。因此在提取物中添加適當(dāng)?shù)牡鞍酌?、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法?br> ??????本產(chǎn)品為經(jīng)優(yōu)化和測試的用于細(xì)菌蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物,包含了廣譜的絲氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制劑、以及氨基肽酶抑制劑。具體組分與Sigma及Millipore同類產(chǎn)品的比較見表1。 ??????表1. 碧云天蛋白酶抑制劑混合物(細(xì)菌抽提用, 100X)與Sigma及Millipore同類產(chǎn)品的比較:
??????本蛋白酶抑制劑混合物含23mM AEBSF, 2mM Bestatin, 0.3mM E64, 2mM Pepstatin A (參考表1),配制在高純度DMSO中。EDTA為單獨(dú)包裝,以便選擇性使用。如用于檢測金屬蛋白酶活性,則不宜添加EDTA。 ??????本產(chǎn)品使用便捷,通常以1:100的比例分別把蛋白酶抑制劑混合物(細(xì)菌抽提用, 100X)和0.1M EDTA加入裂解液中,即可用于細(xì)菌蛋白的提取,并有效抑制蛋白降解。 ??????不同類型的蛋白提取物中含有不同類型的蛋白酶。例如,哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取物中通常含有高豐度的絲氨酸蛋白酶,細(xì)菌細(xì)胞提取物通常含有較多的絲氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶,哺乳動(dòng)物組織提取物中主要含有絲氨酸、半胱氨酸和金屬蛋白酶,植物提取物中常含有大量的絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶,還有一些含有天冬氨酸蛋白酶。為此碧云天針對(duì)不同類型樣品的蛋白提取,提供了不同類型的蛋白酶、磷酸酶等抑制劑混合物以供選擇,具體請參考附表1。 ??????本產(chǎn)品可以有效抑制細(xì)菌提取物中的各種蛋白酶活性,如絲氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、蘇氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶等。其中AEBSF是一種水溶性的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑,其抑制常數(shù)與PMSF和DFP的抑制常數(shù)相似,可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纖溶酶(plasmin)、激肽釋放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶,作為PMSF和DFP的替代物,AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。Bestatin是氨基肽酶可逆抑制劑;E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制劑;Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制劑;EDTA作為螯合劑是金屬蛋白酶的可逆抑制劑。各種抑制劑的具體信息請參考附表2。 ??????蛋白酶、磷酸酶和去乙?;敢种苿┗旌衔锏谋容^和選擇請見:https://www.beyotime.com/support/lysis-inhibitor cocktail.htm。 ??????一個(gè)包裝的本產(chǎn)品通常足夠用于500ml裂解液的配制。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存,一年有效。 注意事項(xiàng): ??????本產(chǎn)品可以適當(dāng)分裝后保存,并應(yīng)在臨使用前添加到裂解液等適當(dāng)溶液中。 ??????本產(chǎn)品提供了獨(dú)立包裝的EDTA,可以選擇性使用。例如,后續(xù)用于檢測提取液中金屬蛋白酶活性,則不宜添加EDTA。 ??????本產(chǎn)品中含有的蛋白酶抑制劑對(duì)人體有害,請注意適當(dāng)防護(hù)。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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