細胞名稱:P3X63Ag8.653 小鼠骨髓瘤細胞
組織來源:B淋巴細胞;漿細胞;骨髓瘤
培養(yǎng)條件:RPMI-1640 +10% FBS
形 態(tài):懸?。涣馨湍讣毎?/p>
背 景:這株細胞能抗8-氮雜鳥嘌呤但對HAT敏感。 可以用作雜交瘤時的融合配體。 能生成但不分泌免疫球蛋白。 據(jù)報道它是由于缺失了3-酮類固醇還原酶活性的膽固醇營養(yǎng)缺陷型。
P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經(jīng)過三個階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數(shù)/100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力zui好時期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進行各種試驗。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)數(shù)目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。
1.接種:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個接種到96孔板,每孔體積200ul.
2.P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)培養(yǎng):同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間)。
3.呈色:培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。
4.比色:選擇490nm波長,在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)生長曲線。
關(guān)鍵字: P3X63AG8.653_小鼠骨髓瘤細胞_小鼠細胞系_
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