細胞名稱：RBL-2H3 大鼠嗜堿性細胞白血病細胞
組織來源：外周血；化學(xué)誘變嗜堿性細胞；白血病
培養(yǎng)條件：MEM +15% FBS(滅活)
形 態(tài)：貼壁；成纖維細胞
背 景：RBL-2H3是1978年國立牙科研究所的免疫學(xué)實驗室從Wistar大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細胞中分離和克隆出來的嗜堿性白血病細胞株。 這些細胞具有高親和力的IgE受體。通過集聚這些受體或與鈣離子載體協(xié)同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質(zhì)。這株細胞廣泛地用于研究肥大細胞FcERI和分泌的生化途徑。 RBL-2H3細胞是研究FcERI結(jié)構(gòu)的模型。它們廣泛地用于研究細胞分泌的不同方面，包括細胞內(nèi)鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。雖然幾乎所有批號的FBS都支持細胞的生長，但在某些批號中FcERI集聚后脫?；酶?。另一株大鼠嗜堿性細胞株(RBL，ATCC CRL-1378)不會脫?；?。
RBL-2H3(大鼠嗜堿性細胞白血病細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數(shù)／100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進行各種試驗。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活RBL-2H3(大鼠嗜堿性細胞白血病細胞)數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.RBL-2H3(大鼠嗜堿性細胞白血病細胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間）。
3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制RBL-2H3(大鼠嗜堿性細胞白血病細胞)生長曲線。
關(guān)鍵字： RBL-2H3_大鼠嗜堿性細胞白血病細胞_大鼠細胞系_
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