本試劑盒采用獨特的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,強烈有機抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于離心柱內(nèi)特殊硅基質(zhì)膜, 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)進一步去除, 最后低鹽的洗脫液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。 近年來對RNA干擾和調(diào)節(jié)性小RNA的廣泛研究迫切需要一種能有效提取15~30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的試劑盒。但是傳統(tǒng)的RNA提取方法如硅膠膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本試劑盒的出現(xiàn)很好的解決了這一問題。 產(chǎn)品組分: Lysis/Binding buffer————50ml 70%乙醇——————————9ml Wash Solution 1——————12ml Wash Solution 2/3—————10ml RNase-free H2O——————10ml 吸附柱和收集———————50套 microRNA吸附柱和收集管——50套 產(chǎn)品特點: 1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。 克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。 2. 也不需要乙醇沉淀等容易喪失微小分子RNA的步驟。 3. 快速,簡捷,單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。 4. 多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.9~2.0,基本無DNA殘留,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各種實驗。 注意事項: 1. 次使用前請先在70%乙醇、Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入! 2. 所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達到13000rpm 的傳統(tǒng)臺式離心機,如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。 3. 需要自備乙醇,氯仿,一次性注射器,研缽。 4. Lysis/Binding buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。 5. 預防RNase 污染,應注意以下幾方面: 1) 經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌,可能導致RNase 污染。 2) 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。 3) RNA 在裂解液中時不會被RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時,塑料器皿可在0.5M NaOH 中浸泡10 分鐘,然后用水徹底清洗,再滅菌,即可去除RNase。 4) 配制溶液應使用無RNase 的水。(將水加入到干凈的玻璃瓶中,加入DEPC至終濃度0.1%( v/v),37℃放置過夜,高壓滅菌。) 6. RNA 純度及濃度檢測: 完整性:RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件:膠濃度1.2%;0.5×TBE 電泳緩沖液;150v,15 分鐘)檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA 為rRNA,電泳后UV 下應能看到非常明顯的rRNA 條帶。動物rRNA 大小分別約為5kb和2kb,分別相當于28S 和18S rRNA。動物RNA 樣品中rRNA 亮度應為次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍,否則表示RNA 樣品的降解。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴重降解。 純度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標。高質(zhì)量的RNA,OD260/OD280 讀數(shù)(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間,在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間,但這并不表示RNA 不純。 濃度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀釋n 倍,用RNase-free 水將分光光度計調(diào)零,取稀釋液進行OD260, OD280 測定,按照以下公式進行RNA濃度的計算:終濃度(ng/μl)= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。 儲存條件:室溫,有效期6個月。(Lysis/Binding buffer需4℃避光保存) 本制品別名:細胞miRNA純化試劑盒|細胞miRNA分離試劑盒|細胞microRNA提取試劑盒|細胞microRNA分離試劑盒|細胞microRNA純化試劑盒|細胞microRNA提取試劑盒|組織miRNA純化試劑盒|組織miRNA分離試劑盒|組織microRNA提取試劑盒|組織microRNA分離試劑盒|組織microRNA純化試劑盒|組織microRNA提取試劑盒
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