??????碧云天生產(chǎn)的鹽酸乙醇慢速分化液(Acid Alcohol Slow Differentiation Solution)是一種用于蘇木素染色、蘇木素伊紅染色(HE染色)或Masson染色等涉及蘇木素染色時(shí),相對(duì)較為緩慢地降低細(xì)胞漿等背景性的蘇木素染色并使細(xì)胞核蘇木素染色更清晰的溶液。 ??????碧云天生產(chǎn)的鹽酸乙醇慢速分化液,分化時(shí)間較慢,約需30秒,便于更精細(xì)地控制分化時(shí)間。如果希望更快速地完成分化,可以考慮選購(gòu)鹽酸乙醇快速分化液(C0163)或鹽酸乙醇超快速分化液(C0165)。 ??????使用本產(chǎn)品可獲得更好的蘇木素染色效果。本產(chǎn)品的基本原理是在酸性條件下,可以有效洗去細(xì)胞核以外的蘇木素染色,從而降低背景;同時(shí),也可以使細(xì)胞核著色過(guò)深的區(qū)域染色適當(dāng)減弱,使染色更清晰。 ??????蘇木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被稱(chēng)作蘇木精染色,是最常用的組織和細(xì)胞的染色方法之一。無(wú)色的蘇木素(hematoxylin)氧化后形成有醌環(huán)結(jié)構(gòu)(quinoid ring)的氧化蘇木素(hematein or haematein),從而可以和三價(jià)的鋁離子、鐵離子等形成有顏色的帶正電荷的復(fù)合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化蘇木素(也稱(chēng)氧化蘇木精)和鋁離子等形成有色的復(fù)合物的過(guò)程也被稱(chēng)為Dye Lake Formation。細(xì)胞核內(nèi)基因組DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,雙鏈上的磷酸基團(tuán)向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復(fù)合物結(jié)合,從而形成細(xì)胞核染色。蘇木素染色液有多種不同的配制方法,不同的方法可以把細(xì)胞核染色成不同深淺的藍(lán)色或藍(lán)紫色。 ??????蘇木素是優(yōu)良的細(xì)胞核染色劑,但由于細(xì)胞質(zhì)中RNA和線(xiàn)粒體DNA的存在,也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)非預(yù)期的染色。因此蘇木素染色后經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)有較高背景或細(xì)胞核染色過(guò)深的情況。鹽酸乙醇分化液的作用主要通過(guò)溶液中的pH值等以弱化氧化蘇木素和RNA或DNA形成有色的復(fù)合物從而使細(xì)胞質(zhì)中幾乎沒(méi)有蘇木素染色,而細(xì)胞核的蘇木素染色比較適中。分化過(guò)程中,細(xì)胞核中的蘇木素染色在酸性條件下呈現(xiàn)紅色,當(dāng)細(xì)胞核的顏色達(dá)到適宜程度時(shí),立刻用自來(lái)水洗滌以終止分化,此時(shí)細(xì)胞核中蘇木素染色在近中性的條件下而轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色,稱(chēng)為返藍(lán)或發(fā)生藍(lán)化作用。分化的適宜程度是指經(jīng)水洗返藍(lán)后用顯微鏡觀察,細(xì)胞核膜特別是細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,而細(xì)胞漿及其它部分基本沒(méi)有背景染色,后續(xù)再用伊紅染色,就能獲得細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映、鮮艷漂亮的染色結(jié)果。如果分化不充分,細(xì)胞核為深藍(lán)色,不能辯認(rèn)出核膜及染色質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu),且細(xì)胞漿等仍有淺藍(lán)色背景,經(jīng)伊紅染色后即成紅紫色,會(huì)影響觀察效果。如果分化過(guò)度,細(xì)胞核染色會(huì)呈現(xiàn)淺藍(lán)色,導(dǎo)致僅能看出輪廓甚至模糊不清。 ??????本鹽酸乙醇分化液的組分經(jīng)過(guò)反復(fù)優(yōu)化,分化速度相對(duì)較慢,通常需分化30秒左右,可以比較精細(xì)地控制分化時(shí)間,特別適合對(duì)于蘇木素染色分化的要求非常精細(xì)或者對(duì)于分化操作不是很熟練的實(shí)驗(yàn)人員。蘇木素染色后的組織切片經(jīng)本分化液分化處理后,核質(zhì)著色更加清晰分明。本產(chǎn)品用于石蠟切片蘇木素染色后的分化前后同一視野效果圖參考圖1。
??????圖1. 本產(chǎn)品用于小鼠睪丸石蠟切片蘇木素染色后同一視野分化前后的實(shí)拍效果圖。左圖為未經(jīng)分化處理的效果圖,右圖為經(jīng)本產(chǎn)品分化處理后的效果圖。從圖中可見(jiàn),經(jīng)本產(chǎn)品分化處理后,蘇木素染色的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,核質(zhì)清晰分明,背景呈現(xiàn)純凈的白色。本圖僅作參考,不同的樣品不同的檢測(cè)條件,實(shí)際獲得的結(jié)果可能有所差別。Scale bar, 100μm。
??????按照每個(gè)樣品使用0.2ml鹽酸乙醇分化液計(jì)算,一個(gè)包裝的C0161S、C0161M和C0161L分別可以分化500個(gè)、2500個(gè)和10000個(gè)樣品。如果用于浸泡式的分化操作,建議在使用約10-20次并且分化效果明顯減弱后更換分化液。 包裝清單:
保存條件: ??????室溫保存,至少一年有效。 注意事項(xiàng):? ??????本產(chǎn)品易揮發(fā),請(qǐng)注意密閉保存。為避免揮發(fā)導(dǎo)致的使用效果下降,開(kāi)啟后宜盡快用完。 ??????染色后的分化為選做步驟,但分化后核質(zhì)染色更清晰,核膜及染色質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)更清楚。 ??????樣品數(shù)量很多時(shí),可以使用碧云天生產(chǎn)的染色架(FJ024、FJ026、FJ030、FJ060)和染色缸(FG005、FG010、FG030、 FG060),便于操作。 ??????如果訂購(gòu)的是C0161L鹽酸乙醇慢速分化液(20X),需要自備75%乙醇,以用于把鹽酸乙醇慢速分化液(20X)稀釋20倍配制成鹽酸乙醇慢速分化液。 ??????不同樣品和不同染色要求,所需要的分化時(shí)間會(huì)有所不同。初次使用本產(chǎn)品建議先摸索不同分化時(shí)間,根據(jù)鏡下觀察結(jié)果,確定的分化時(shí)間。也可以根據(jù)需求選擇碧云天的鹽酸乙醇快速分化液(C0163)或鹽酸乙醇超快速分化液(C0165)。 ??????本產(chǎn)品為易燃液體,須密閉儲(chǔ)存于陰涼、干燥、通風(fēng)良好的地方,建議存放在易燃液體的專(zhuān)用安全柜中,并遠(yuǎn)離明火、火花、熱源、熱表面,禁止吸煙。 ??????本產(chǎn)品有腐蝕性,操作時(shí)請(qǐng)小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。 ??????本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
碧云天生物技術(shù)有限公司
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