??????碧云天的質粒大量抽提試劑盒(Plasmid Maxi Preparation Kit, Plasmid Maxiprep Kit)是一種用于從大腸桿菌中進行大量質??焖俪樘岬碾x心柱式試劑盒。 ??????本試劑盒適用于常用的EndA-菌株DH5A、JM109和XL-1 blue等。對于EndA+菌株如JM110、BL21 (DE3)、TG1和HB101 等,可以順利完成質粒抽提,但從EndA+菌株中抽提獲得的質粒會有輕微的核酸酶污染,如果在內切酶緩沖液中37℃孵育1小時會導致質粒全部降解。從EndA+菌株中抽提質粒時推薦使用碧云天的D0007S/D0007M 質粒小量抽提試劑盒(通用型)、D0020 質粒中量抽提試劑盒(通用型)和D0028 質粒大量抽提試劑盒(通用型)。 ??????野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I,能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA,如果endA突變失活,其基因型會被標注為endA1,相應的突變菌株被稱為EndA-菌株,而野生型菌株則被稱為EndA+菌株。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質粒,微量核酸酶和質粒結合而容易被共純化,導致容易降解。 ??????本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現(xiàn)質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,6個樣品只需不足90分鐘即可完成。 ??????每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限大于500微克。每個純化柱可用于抽提100毫升左右用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌。抽提所得質粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質粒量會受質粒拷貝數(shù)等因素影響。抽提獲得的質粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。 ??????本試劑盒抽提得到的質??芍苯佑糜谵D染細胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉錄,轉化細菌,內切酶消化等。 包裝清單:
保存條件: ??????室溫保存,一年有效。 注意事項: ??????次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好標記。加入RNase A后4℃存放。 ??????次使用前在溶液IV (洗滌液)中加入150ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。 ??????溫度較低時,溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,37℃水浴加熱溶解,混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻,否則會產生大量氣泡。 ??????溶液II使用完后,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。 ??????溶液II有強堿性,溶液II和溶液III對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 ??????本試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。 ??????廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。 ??????本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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