產(chǎn)品概述

腸激酶（ Enterokinase ，EK）是一種高度特異性的絲氨酸蛋白酶，可以專一識別 DDDDK 序列并在賴氨酸殘基的 C 端進行切割。本品為重組牛源腸激酶輕鏈片段，可以在較寬的 pH 范圍（4.5-9.5）和溫度范圍（4 ~ 45℃)內(nèi)進行有效切割。Vazyme提供有 His-tag 和無 His-tag 兩種腸激酶 ，客戶可結(jié)合應用場景和純化去除工藝進行選擇。

    產(chǎn)品優(yōu)勢

1 、產(chǎn)能充足：5噸級生產(chǎn)線多批次生產(chǎn)，批產(chǎn)達億U級別，多批次生產(chǎn)驗證質(zhì)量穩(wěn)定；

2 、GMP級：生產(chǎn)過程符合GMP要求；

3 、質(zhì)量文件完整：可保障無動物源性、無外源性病毒污染等，質(zhì)量文件齊全。

4、質(zhì)檢體系完善：配套專一性酶活、酶殘留檢測試劑盒，提供入場檢支撐、雜質(zhì)風險控制策略。

5、規(guī)格定制：規(guī)格可根據(jù)客戶需求定制。

      產(chǎn)品信息

        保存條件

儲存條件 ：-30 ~ -15℃ ;

復驗期：24 個月。

產(chǎn)品應用范圍

1 、用于切除重組蛋白 N 端融合標簽；

2 、用于活化胰蛋白酶原；

3 、生物制藥領(lǐng)域常用于重組蛋白 、多肽類藥物的生產(chǎn)制備 ，例如 GLP-1 及其類似物等。

建議反應體系

重組 EK：200-2000 U 可酶切融合蛋白 ：0.1-1 g/L （ 1 L）；

反應時間：25℃反應過夜或者 24 h ，用 SDS-PAGE  或者  HPLC 檢測酶切效果；

4℃反應酶切 ，需要將酶切時間延長至 48-64 h ，或增加  2-3 倍酶量。

注意事項

1 、在＞200 mM 咪唑 ，或＞200 mM NaCl ，或＞5%甘油條件下 ，酶切效果受影響 ，可將樣品進行稀釋或者透析 ，再進行酶切 。如果樣品 溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好的酶切效果。磷酸鹽對 Enterokinase 發(fā)揮活性有影響 ，因此盡量避免酶切體系內(nèi)磷酸鹽的存在。

2 、本司生產(chǎn)的腸激酶比活高 ，使用過程中加量較少 ，可不考慮其除去 。如果確實需要去除 rEK ，建議的去除方法如下：

a.使用親和層析 ，可以利用苯甲脒親和填料純化去除 ，由于腸激酶是一種絲氨酸蛋白酶 ，可以在純化時與苯甲脒填料結(jié)合 ，從而達到 純化目的；

b.使用離子交換填料 ，pH 8.0 條件下，腸激酶與 DEAE 填料結(jié)合 ，并且在0.15 M NaCl 中可以被洗脫 ，可以利用目的蛋白與腸激酶電 荷差異以及與 DEAE 填料的結(jié)合或洗脫的不同條件將二者進行分離；

c.本產(chǎn)品含有 His標簽 ，可使用 Ni 柱親和層析吸附去除。

3 、推薦反應體系是基于我司實驗條件下所獲得 ，使用時可根據(jù)實際情況進行調(diào)整。