產(chǎn)品描述
BCECF, AM是一種檢測細胞質(zhì)pH值的熒光探針。具有細胞膜滲透性，進入細胞后被胞內(nèi)酯酶水解生成BCECF，一種極性熒光衍生物從而被保留在細胞內(nèi)。 BCECF在細胞內(nèi)穩(wěn)定，排出半衰期超過2小時。胞內(nèi)pH測定通過比率成像實現(xiàn)，通過確定pH依賴性的發(fā)射光強度比率，使用熒光分光光度法或流式細胞儀檢測皆可。
BCECF,AM主要用于哺乳動物細胞，也用于植物細胞、酵母等的細胞pH水平檢測。
BCECF, AM還能用于包括鉀離子在內(nèi)的其他離子的胞內(nèi)變化檢測。
參數(shù)信息
英文名稱：2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein acetoxymet
中文名稱：2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素乙酰甲酯
CAS NO：117464-70-7
分子式：C40H36O19
分子量：820.70
閃點：85°C
沸點：692.41°C
密度：1.2837
狀態(tài)：橙色固體
Ex/Em：503/528
溶解性：溶于乙腈，DMSO，DMF
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
體外研究
處理的細胞顯示氫基因體，其電子密度沉積物以不同程度聚集。在某些情況下，在氫酶體內(nèi)部可見染色。顯微鏡下還觀察到，K+/H+離子載體尼日利亞菌素不抑制氫基因體裝載BCECF-AM。ph敏感熒光染料測定細胞質(zhì)ph值。在DMSO.2中配制2至20 mM的BCECF-AM原液。在緩沖溶液中制備5-50 μM BCECF-AM染料上樣液。
3在細胞板中加入1000 μL/孔（6孔）、100 μL/孔（96孔）或25 μL/孔（384孔）的BCECF-AM上染液。將上染板在細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30-60分鐘。洗凈，用緩沖液替換染料上料液。通過在Ex/Em = 490/535 nm或430/535 nm處監(jiān)測熒光來運行pH測定。
細胞實驗
PASMCs被放置在層流細胞室中，灌注了pH調(diào)節(jié)到7.4的HBSS。pHi是用ph敏感熒光染料BCECF-AM的膜滲透形式在37°C、20%O2-5% CO2氣氛下培養(yǎng)60分鐘的細胞中測量的。然后用HBSS在37°C下洗滌細胞15分鐘，以去除細胞外染料，并使胞質(zhì)染料完全去酯化。BCECF熒光的比例測量是在一個工作站進行的，該工作站由Nikon TSE 100橢圓倒置顯微鏡組成，帶有外延熒光附件。氙燈的光束在490 nm和440 nm處經(jīng)過干涉濾光片過濾，通過20倍熒光物鏡聚焦到PASMCS上進行檢測。從細胞發(fā)射的530納米的光通過物鏡返回，并由成像相機檢測。使用電子快門來減少染料的光漂白。pHi是根據(jù)每次實驗后的現(xiàn)場校準估計的。細胞灌注含有（mM）： 105 KCl, 1 MgCl2, 1.5 CaCl2, 10葡萄糖，20 HEPES-Tris和0.01尼日利亞菌素的溶液，以使pHi與外部ph平衡。當pHi用KOH從6.5調(diào)整到7.5時，通過熒光測量產(chǎn)生兩點校準。細胞內(nèi)H+離子濃度（[H+]i）由pHi計算，公式為pHi = - log （[H+]i）。
相關試劑
Coelenterazine Native天然腔腸素
BCECF AM，Cell Permeant pH熒光探針
SBFI AM（Na+ Indicator）鈉離子指示探針
Cal-590 AM，Cell Permeant鈣離子熒光探針
Cal-630 AM，Cell Permeant鈣離子熒光探針
Fluo-4，AM，Cell Permeant鈣離子熒光探針
Fluo-8，AM，Cell Permeant鈣離子熒光探針
Rhod-2，AM，Cell Permeant鈣離子熒光探針
Hydroxyphenyl fluorescein（HPF）羥苯基熒光素
Aminophenyl fluorescein（APF）氨基苯基熒光素
關鍵字： 117464-70-7;BCECF, AM;Fluo-8, AM;
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