堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP/ALP)活性測(cè)定試劑盒
分光光度法 50 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。 AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。
測(cè)定原理:
在堿性環(huán)境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化鉀反應(yīng)紅色亞 醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測(cè)定 510 nm 吸光度增加速率,來計(jì)算 AKP 活性。
粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑 一)進(jìn)行冰浴勻漿,4℃、8000g 離心 10min,取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌或細(xì)胞:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):試劑一體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬 細(xì)胞加入 1ml 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min); 然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血液可直接測(cè)定,或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。
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