轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于轉(zhuǎn)基因大豆、食品和飼料等的定量檢測(cè)、安全評(píng)價(jià)、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制、方法評(píng)價(jià)與驗(yàn)證、技術(shù)仲裁等。
?一、樣品制備?
本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是將轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 轉(zhuǎn)化體特異性序列和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片段共同構(gòu)建于pEASY-T3 載體，得到 pNIM-004 質(zhì)粒分子，經(jīng)提取，純化和質(zhì)量檢測(cè)及均勻性初檢合格后稀釋至4.02×106copy/μL 進(jìn)行分裝。
?二、溯源性及定值方法該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用測(cè)序法、數(shù)字 PCR 方法對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 轉(zhuǎn)化體特異性基因片段和大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片斷的拷貝數(shù)比值進(jìn)行定值測(cè)量。測(cè)序法測(cè)量結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)序比值標(biāo)準(zhǔn)值；數(shù)字 PCR 方法測(cè)量結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) PCR 比值標(biāo)準(zhǔn)值。本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通過(guò)使用滿(mǎn)足計(jì)量學(xué)特性要求的制備方法、測(cè)量方法和計(jì)量器具，保證其量值溯源性。
?三、特性量值及不確定度
| 編 號(hào) | 標(biāo)準(zhǔn)值及不確定度 |
| GBW10092 | 測(cè)序比值 | 擴(kuò)展不確定度（k=2） | PCR 比值 | 擴(kuò)展不確定度（k=2） |
| 1 | 0.04 | 1.01 | 0.09 |
標(biāo)準(zhǔn)值不確定度評(píng)定考慮了定值方法、均勻性、穩(wěn)定性引入的不確定度分量。?
四、均勻性和穩(wěn)定性評(píng)估?
參照 JJF1343 國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范（等效 ISO 指南 35），采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法，對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)研究，最小取樣量 5μL，結(jié)果表明均勻性良好。按照先密后疏的原則采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性考察研究，標(biāo)準(zhǔn)值無(wú)方向性變化并通過(guò)平均值一致性檢驗(yàn)，表明穩(wěn)定性良好。?
本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)自定值日期起，有效期為 7 年，研制單位將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測(cè)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，有效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化，將及時(shí)通知用戶(hù)。?
五、包裝、儲(chǔ)存及使用?
1.包裝與儲(chǔ)存：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用 2mL 立式擰口塑料離心管包裝，500μL/瓶。建議-70?C 低溫長(zhǎng)期保存。
?2.使用注意事項(xiàng)：使用前應(yīng)先從冰箱內(nèi)取出，平衡至室溫后再打開(kāi)瓶蓋使用。樣品開(kāi)封后，應(yīng)盡快恢復(fù)密封狀態(tài)。?
3.使用建議：使用本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)，按照表 1 進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)缓笤俨捎脽晒舛縋CR 進(jìn)行檢測(cè)，引物和探針序列詳見(jiàn)表 2。
?表 1 轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)梯度稀釋說(shuō)明
初始濃度（copy/μL） | 終濃度（copy/μL） | 質(zhì)粒?DNA(μL） | TE(μL） |
4.02×106 | 4.02×105 | 20 | 180 |
4.02×105 | 4.02×104 | 20 | 180 |
4.02×104 | 4.02×103 | 20 | 180 |
4.02×103 | 4.02×102 | 20 | 180 |
4.02×102 | 4.02×101 | 20 | 180 |
表 2 ?外源基因和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因的引物及探針序列
基因名稱(chēng) | 引物或探針 | 序列信息 (5’-3’) | 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度 /(堿基) |
外源基因 MON89788 | 上游引物 | TCCCGCTCTAGCGCTTCAAT | 139 |
下游引物 | TCGAGCAGGACCTGCAGAA |
探針 | FAM-CTGAAGGCGGGAAACGACAATCTG-TAMRA |
內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因?Lec | 上游引物 | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | 74 |
下游引物 | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC |
探針 | FAM-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-TAMRA |
六、參考文獻(xiàn)
[1] Delobel C.,NoensW., Querci M., Mazzara M., Cordeil S., Event-specific Method?for the Quantificaiton?of?Soybean?Line?MON89788?Using?Real-time?PCR:?Validation?Report.?2008.?Joint?Research?Centre,?Institute?for
Health and Consumer Protection.
相關(guān)產(chǎn)品信息| 編號(hào) | 產(chǎn)品名 | CAS | 規(guī)格 | 品牌 | 價(jià)格 | 過(guò)期時(shí)間 |
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| GBW10092 | 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/轉(zhuǎn)基因大豆MON89788質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | | 500μL | 中國(guó)計(jì)量院 | 720 | |
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