植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)
——最常用的促有絲分裂原(Mitogen)
關(guān)鍵詞:淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(T Lymphocyte Transformation Test),非特異性有絲分裂原(mitogen),T細胞活化和增殖,PHA-M,PHA-P,PHA-L,PHA-E,Con A,CAS:9008-97-3
T淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(T Lymphocyte Transformation Test)背景與意義:T細胞在體外培養(yǎng)時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現(xiàn)細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉(zhuǎn)化。淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。
Phytohemagglutinin(植物血凝素),簡稱為PHA,多指來源于Phaseolus Vulgaris菜豆屬(紅腰豆)的凝集素(lectin),常用于人淋巴細胞培養(yǎng)物的促有絲分裂原(mitogen),具有促進有絲分裂和誘導干擾素分泌的活性。PHA誘導B細胞活化效應(yīng)比較弱,主要用做T細胞活化誘導劑。
植物血凝素(PHA)屬于高分子糖蛋白,是低聚糖(由半乳糖,N-乙酰葡糖胺和甘露糖所構(gòu)成)和蛋白質(zhì)形成的復合物。由4個亞基通過非共價鍵結(jié)合形成的四聚體糖蛋白,包含兩種亞基分子,L亞基(白細胞凝集素)和E(紅細胞凝集素),因此含有5種異構(gòu)體(L4, L3E1, L2E2, L1E3和E4)。L亞基具有白細胞凝集和高促有絲分裂活性,E亞基具有高紅細胞凝集和低促有絲分裂活性。
目前市場上提供的植物血凝素(PHA)主要以PHA-L,PHA-E,PHA-M和PHA-P四種形式提供,在應(yīng)用上具有一些差異,具體如下:
純化的L4,是白細胞凝集素,具有高促有絲分裂和白細胞凝集活性,但紅細胞凝集活性極低。廣泛用于免疫學研究,比如用作PBMC培養(yǎng)的刺激物;用作INF-γ ICS、ELISPOT實驗的陽性對照;或用作順行性神經(jīng)示蹤劑。
純化的E4,是紅細胞凝集素,具有低促有絲分裂活性和高紅細胞凝集活性。不具有血型特異性,但凝集作用會受到某些寡糖抑制。也常用于糖基化修飾研究。
為未分離純化PHA-E和PHA-L之前的原PHA蛋白形式(含PHA-E及PHA-L二種分子)。
PHA的粘性蛋白形式(mucoprotein form),與PHA-P成分差不多,都是粗提物,主要用于刺激外周血單個核細胞增殖,促進一些細胞因子生成和膜表面蛋白的表達。PHA-M具有強大的紅細胞凝集特性,最初用來分離全血中的淋巴細胞。
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