基于qPCR 檢測技術(shù)的miRNA 表達及差異分析是對測序、芯片結(jié)果的有效補充與驗證，是進一步確定研究對象并做后續(xù)功能研究或生物標志物篩選的基礎。
銳博生物專利：高靈敏度小RNA定量檢測方法及試劑盒. 授權(quán)專利號：CA201410039162.6
Bulge-Loop? miRNA qRT-PCR
1、高特異性，采用具有莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄引物以和高特異miRNA正向引物，確保該方法的特異性，能準確檢測出高度同源的miRNA
2、高靈敏度，比傳統(tǒng)的miRNA 定量檢測方法具有更寬廣的動態(tài)變化范圍，無需擔心因樣品量少或者miRNA 表達量低而無法精確檢測
3、高準確性，可驗證微陣列表達譜數(shù)據(jù)的準確性，有效地檢測出miRNA 表達量，且重復性高。
Bulge-Loop miRNA頸環(huán)法引物套裝包括：Bulge-Loop RT primer、Forward primer和Reverse primer。
miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR
1、靈敏度高，精確定量miRNA表達量
2、特異性好，甚至可準確區(qū)分miRNA 成熟鏈和前體
3、節(jié)省樣本，一次轉(zhuǎn)錄可同時檢測多種miRNA 及其他各種RNA
4、適用于各種樣品的miRNA 表達譜檢測
miDETECT A miRNA加尾法引物：Forward Primer。
miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR能夠準確檢測miRNA表達量，并在較寬的定量區(qū)間內(nèi)得到很好的標準曲線，檢測限度從1fM 至100pM，適合進行miRNA 準確定量檢測。
以 6 個數(shù)量級連續(xù)梯度（1fM, 10fM, 100fM, 1pM, 10pM, 100pM）稀釋的miRNA 標準品（hsa-miR-16、hsa-miR-21）進行miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 檢測，每個梯度3 個平行樣，擴增效率（E）超過96%，檢測相關(guān)性（R2）達到1.00，靈敏、準確。
miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 采用特異性優(yōu)化的設計算法，能夠?qū)蝹€樣品中的多種RNA 通過通用的Poly(A) Tailing 和Uni-RT 反應，及特異性qPCR 檢測，可準確區(qū)分序列相似的miRNA 成熟鏈，重復性好，可信度高，甚至能區(qū)分大部分成熟體和前體。
分別以8 個10pM 的miDETECT? miRNA qRT-PCR Standard RNA 為模板，采用8 種miDETECT A Track? miRNA引物進行特異性qRT-PCR 檢測，結(jié)果表明僅對應的miRNA 引物能夠特異性檢測，無非特異性擴增現(xiàn)象出現(xiàn)。
A：miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 檢測擴增曲線; B：引物特異性統(tǒng)計分析結(jié)果
由于對樣品進行的Poly(A) Tailling 和Uni-RT 具有通用性，所以經(jīng)過一次反轉(zhuǎn)錄得到的產(chǎn)物即可檢測mature miRNA、miRNA precursor、snoRNA、snRNA、piRNA、lncRNA 和mRNA ( 注：引物需要特殊設計) 等多種RNA，檢測結(jié)果準確且重復性高。
樣品中總RNA 采用miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 方法檢測miRNA(hsa-miR-638、hsa-miR-760、hsa-miR-1207、hsa-miR-4281)，snRNA(U6)，lncRNA(7SL1) 為模板，準確定量檢測多種RNA 的表達量。