動(dòng)物用siRNA 是采用特殊化學(xué)修飾并且可以直接注射動(dòng)物的in vivo siRNA，采用國(guó)際領(lǐng)先合成平臺(tái)、專利工藝和質(zhì)量控制體系，具有高效、特異、穩(wěn)定、低毒的優(yōu)勢(shì)，動(dòng)物用siRNA 可確保體內(nèi)RNAi 實(shí)驗(yàn)更出色的完成。銳博生物的in vivo siRNA廣泛應(yīng)用于動(dòng)物疾病模型關(guān)鍵基因靶標(biāo)確認(rèn)的研究中，如通過(guò)抑制致病基因表達(dá)治療疾病。目前，全球范圍已有上百種RNAi 藥物進(jìn)入臨床研究，2018年第一個(gè)siRNA藥物獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，引領(lǐng)了核酸藥的最新發(fā)展。銳博生物還提供上百種化學(xué)修飾的siRNA，幫助客戶探索更多siRNA的功能應(yīng)用。
動(dòng)物體內(nèi)生理環(huán)境非常復(fù)雜，動(dòng)物用siRNA（又稱in vivo siRNA）一般必須要提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性、半衰期、靶向性、純度、藥活性以及降低毒性等才可以用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，通常需要采用特殊的化學(xué)修飾或制備工藝以實(shí)現(xiàn)上述的目的
① 穩(wěn)定性，siRNA 易被酶降解，難以在體內(nèi)持續(xù)發(fā)揮作用。
② 安全性，siRNA 非特異作用引起“脫靶” 效應(yīng)，同時(shí)外源RNA 引發(fā)免疫反應(yīng)。
③ 給藥方式，必須提高 siRNA 生物利用度，有效作用于病變區(qū)域。
銳博生物采用自主專利siRNA化學(xué)修飾技術(shù)，原料采用高品質(zhì)進(jìn)口原料，通過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量檢測(cè)控制體系，有效增強(qiáng)in vivo siRNA的穩(wěn)定性，具有良好siRNA血清穩(wěn)定性，并保持siRNA高效活性，降低免疫原性，更大限度降低siRNA對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毒性，最大限度滿足給藥要求，有效提高in vivo siRNA生物利用度，每批次均可質(zhì)量溯源和提供完整質(zhì)量文件。
■ 穩(wěn)定化學(xué)修飾，有效保護(hù) siRNA 不受核酸酶降解
■ 精確序列設(shè)計(jì)，有效降低“脫靶效應(yīng)”
■ 獨(dú)特化學(xué)修飾，有效降低免疫反應(yīng)
■ 高效化學(xué)修飾，提高生物利用度
■ 已經(jīng)脫鹽、去內(nèi)毒素處理，可直接注射于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
■ 合成規(guī)格可達(dá)100g級(jí)以上
■ RNAi 治療藥物開發(fā)
■ 藥物靶標(biāo)體內(nèi)鑒定和確認(rèn)
■ 基因功能體內(nèi)研究
■ 富含核酸酶環(huán)境下的 RNAi 實(shí)驗(yàn)
常用化學(xué)修飾方式
圖1 siRNA常用化學(xué)修飾位點(diǎn)和常用的化學(xué)修飾方式
常用siRNA化學(xué)修飾方式
修飾方式
| 修飾類型 | 主要功能 |
2’-OMe FC（氟代） FU（氟代）
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核糖修飾 |
增強(qiáng)抗核酸酶活性的能力，提高siRNA穩(wěn)定性 |
PS（硫代磷酸）
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磷酸骨架修飾 |
增強(qiáng)抗核酸酶活性的能力，提高siRNA穩(wěn)定性 |
5’-Cy3 3’-Cy3 5’-Cy5 3’-Cy5
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熒光染料標(biāo)記 |
優(yōu)化各種細(xì)胞的轉(zhuǎn)染條件，跟蹤細(xì)胞或動(dòng)物體 內(nèi)siRNA的吸收及分配 |
5’-Chol（膽固醇） 3’-Chol（膽固醇）
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末端連接 |
促進(jìn)細(xì)胞對(duì)siRNA的吸收，延長(zhǎng)siRNA在血清 中的半衰期
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5’-Phosphate 5’-Biotin-linker 3’-Biotin-linker 5’-Thiol-linker 3’-NH2 -linker
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末端連接 |
用于RNAi機(jī)理和生物學(xué)等研究 |
5’-維生素E-linker 5’-葉酸-linker 5’-膽酸-linker 5’-PEG-linker
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末端連接
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提高機(jī)體對(duì)siRNA靶向性吸收，延長(zhǎng)siRNA在 血清中的半衰期等 |
給藥方式與給藥劑量參考
給藥方法大致分為系統(tǒng)給藥（如靜脈給藥、腹腔給藥等）和局部給藥（如皮下注射，玻璃體給藥，鞘內(nèi)給藥等）。首先需要根據(jù)動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)方案，確定給藥量和給藥次數(shù)，然后計(jì)算出實(shí)驗(yàn)所需的總用量。需要根據(jù)不同的器官來(lái)選擇給藥方法，而給藥量因不同給藥方法和實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。如肝臟、腎臟、肌肉等常用靜脈注射（系統(tǒng)給藥）；而皮下腫瘤則常用到瘤內(nèi)注射（局部給藥）。對(duì)于in vivo siRNA，推薦系統(tǒng)給藥每次注射5~20nmol/20g體重，局部給藥則需每次注射1~5nmol/20g體重，給藥頻率往往是一周2~3次，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究目的靈活調(diào)整給藥方案。
in vivo siRNA給藥方式示意圖
（如：口服、靜脈注射、皮下注射、眼內(nèi)注射、腦室內(nèi)注射、肌肉注射、椎管內(nèi)注射、皮內(nèi)注射、淋巴腔注射、鼻腔注射、舌下注射、腹腔注射等）
口服給藥：安全方便，經(jīng)胃腸道吸收，這類化合物利用率最低；
腹腔給藥：不存在胃腸道首過(guò)代謝，但依然存在肝臟首過(guò)代謝，生物利用率較高；
靜脈給藥：不存在吸收屏障和首過(guò)代謝屏障，生物利用度最高；
皮下注射和肌肉注射：經(jīng)皮下和肌肉毛細(xì)管吸收，吸收沒有靜脈注射完全，但可避開胃腸道和肝臟首過(guò)代謝；
皮內(nèi)注射：把siRNA藥液注射入表皮和真皮之間，皮內(nèi)注射吸收較慢；
腦內(nèi)注射：精確注射藥物進(jìn)入大腦腦室或大腦特定組織，如海馬體、黑質(zhì)等，跳過(guò)藥物吸收和血腦屏障，給藥體積很小。
從生物利用度的角度，靜脈給藥最高，依次是靜脈給藥>腹腔>肌肉>皮下>口服。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)案例結(jié)果
in vivo siRNA和對(duì)照siRNA稀釋于水中，以20 mg/kg的劑量，每3天注射1次，連續(xù)給藥7周，將膽固醇修飾的動(dòng)物用CamK-A siRNA注射到荷瘤小鼠中，檢測(cè)腫瘤大小，發(fā)現(xiàn)使用in vivo siRNA敲降CamK-A可顯著降低腫瘤生長(zhǎng)，巨噬細(xì)胞募集以及血管生成。
Sang L, et al. Molecular cell, 2018.
銳博生物in vivo siRNA 局部注射給藥有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，分別注射PBS 和siRNA。
A：PBS 對(duì)照； B：in vivo siRNA 三天給藥一次
通過(guò)瘤內(nèi)注射的方式將膽固醇修飾的IFIT3 siRNA注射到SMMC-LTNM小鼠中，并用IFN-α治療，測(cè)定腫瘤大小和血清AFP，發(fā)現(xiàn)IFIT3 siRNA處理減弱了IFN-α在肝癌中的抗腫瘤作用。
Yang Y, et al. Hepatology, 2017.
通過(guò)瘤內(nèi)注射，將膽固醇修飾的動(dòng)物用circMTO1 siRNA注射到HCC荷瘤裸鼠SMMC-LTNM中，測(cè)定腫瘤大小和血清AFP，發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長(zhǎng)明顯加快，血清AFP明顯增加。
Han D, et al. Hepatology, 2017.
關(guān)鍵字： 動(dòng)物;siRNA;化學(xué)修飾;
廣州市銳博生物科技有限公司（簡(jiǎn)稱銳博生物）成立于2004年，是一家由諾貝爾獎(jiǎng)獲得者和國(guó)家重大人才工程入選者領(lǐng)銜的、以核酸技術(shù)為核心的國(guó)家火炬計(jì)劃重點(diǎn)高新技術(shù)企業(yè)?；谑澜珙I(lǐng)先的寡核苷酸和mRNA技術(shù)，銳博生物致力于提供高品質(zhì)的各類寡核苷酸和mRNA產(chǎn)品（包括但不限于ASO、siRNA、CpG、Aptamer、crRNA、和tracrRNA）。此外，公司建立了符合或超過(guò)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的寡核苷酸CDMO/CMO服務(wù)平臺(tái)、mRNA/LNP制劑開發(fā)和制造平臺(tái)，能夠?yàn)楹怂崴幬镩_發(fā)的各個(gè)階段提供一站式寡核苷酸/mRNA CDMO服務(wù)、以及LNP制劑開發(fā)和制造服務(wù)，為國(guó)內(nèi)外超過(guò)5000家機(jī)構(gòu)提供產(chǎn)品或服務(wù)，現(xiàn)已躋身于全球核酸藥CDMO的知名企業(yè)行列。銳博生物擁有60多項(xiàng)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)核酸技術(shù)發(fā)明，獲得了廣東省核酸藥物工程實(shí)驗(yàn)室、廣東省核酸醫(yī)藥工程技術(shù)研究中心、NMPA頒發(fā)的寡核酸藥品生產(chǎn)許可等資質(zhì)，是中國(guó)核酸行業(yè)的領(lǐng)軍企業(yè)之一。