品名：Smart-RNA-Pull? RNA Pull-down Kit，貨號(hào)：IF9608，品牌：Engibody

訂購及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號(hào))

NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校課題組青睞并長期采購的RNA Pull-down試劑盒！

RNA-結(jié)合蛋白體外Pull-down實(shí)驗(yàn)試劑盒

Smart-RNA-Pull?
RNA Pull-down試劑盒的4大優(yōu)勢(shì)
1、本試劑盒適用于貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、動(dòng)物組織、植物組織及純化后的重組蛋白，適用于末端生物素標(biāo)記的各種長度和復(fù)雜性的RNA探針。適用內(nèi)源性、過表達(dá)或體外翻譯的蛋白作為樣本類型。
 
2、本試劑盒使用生物素標(biāo)記RNA探針直接捕獲目的蛋白。pull-down時(shí)不需要抗體，也不需要離心。完成RNA標(biāo)記反應(yīng)后僅需極少的手動(dòng)操作時(shí)間（小于3小時(shí)）。
 
3、本試劑盒適用于RBP與mRNA、RBP與LncRNA、RBP與miRNA、RBP與circRNA相互作用，下游銜接已知蛋白的Western blot驗(yàn)證檢測(cè)和未知蛋白的質(zhì)譜鑒定。
 
4、本說明書是一本RNA Pull-down實(shí)驗(yàn)的全面技術(shù)手冊(cè)，匯總了RNA與各種蛋白互作的詳細(xì)信息?？赐赀@本保姆級(jí)說明書，所有疑難都會(huì)迎刃而解，RNA Pull-down盡在掌握之中。




第一部分：背景簡介及應(yīng)用場景
RNA與蛋白質(zhì)相互作用分析
95%的人類基因組實(shí)際上并不編碼蛋白質(zhì)，而是產(chǎn)生大量非編碼RNA（ncRNA），這些RNA在生命的生長和發(fā)育中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，與艾滋病病毒/艾滋病、白血病、糖尿病等各種疾病密切相關(guān)，并參與干細(xì)胞發(fā)育和表觀遺傳學(xué)的調(diào)節(jié)。RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物驅(qū)動(dòng)幾乎所有細(xì)胞過程中基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)，包括剪接、核輸出、mRNA穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)翻譯。因此，對(duì)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和機(jī)制的理解取決于確定這些過程中RNA結(jié)合的變化。
 
RNA結(jié)合蛋白通過與單鏈RNA結(jié)合基序（RBM）結(jié)合來控制細(xì)胞生物學(xué)的許多方面。然而，RBM可以隱藏在其局部RNA結(jié)構(gòu)中，從而抑制RNA與蛋白質(zhì)的相互作用。
 
RNA與蛋白質(zhì)相互作用的研究越來越受到科學(xué)家的關(guān)注，成為表觀遺傳學(xué)研究的熱點(diǎn)。
 
目前RNA研究的國自然熱點(diǎn)主要是mRNA、LncRNA、miRNA、circRNA四大類。

磁珠法RNA-蛋白Pull-down捕獲試劑盒為研究人員提供了一種簡化、高效的方法，使用末端生物素標(biāo)記的RNA作為誘餌來富集與RNA互作的蛋白。
 
適用于RBP與mRNA、RBP與LncRNA、RBP與miRNA、RBP與circRNA相互作用。
 
下游銜接已知蛋白的Western blot驗(yàn)證檢測(cè)和未知蛋白的質(zhì)譜鑒定。
 
 
1、RNA Pull-down和RIP、RNA-EMSA、CLIP，這四種研究RNA-蛋白互作技術(shù)的內(nèi)在區(qū)別是什么？
1)、RNA Pull-down———In Vitro體外通過RNA探針捕獲目的蛋白或其他候選蛋白，獲取蛋白后進(jìn)行WB檢測(cè)或MS質(zhì)譜鑒定。也是經(jīng)典方法。
 
2)、RNA-EMSA———RNA電泳凝膠遷移阻滯實(shí)驗(yàn)(Electrophoretic Mobility Shift Assay)，In Vitro體外通過RNA探針檢測(cè)目的蛋白，反向驗(yàn)證了RIP。是經(jīng)典方法。
 
3)、RIP———RNA蛋白免疫沉淀技術(shù)是一種用于在細(xì)胞天然背景下In Vivo體內(nèi)探測(cè)蛋白質(zhì)-RNA 相互作用的技術(shù)。這種方法可以用于檢測(cè)特定RBP蛋白與RNA的結(jié)合水平。
 
4)、CLIP———這是近年來的新興技術(shù)，紫外交聯(lián)RNA-RBP免疫沉淀技術(shù)，可以分為HITS-CLIP(CLIP-Seq)、PAR-CLIP、iCLIP、miCLIP。
 
2、RNA Pull-down和RIP的聯(lián)合分析，相互驗(yàn)證
這是經(jīng)典研究策略，RIP是體內(nèi)In Vivo研究RNA和蛋白互作，RNA Pull-down是體外In Vitro捕獲與RNA互作的已知蛋白或未知蛋白，互相印證。


第二部分：技術(shù)原理和技術(shù)流程

技術(shù)原理：
當(dāng)固定在鏈霉親和素磁珠上的RNA探針與蛋白樣本混合孵育時(shí)，樣本中可以與RNA探針結(jié)合的蛋白被探針捕獲，并與探針形成蛋白-探針復(fù)合物，經(jīng)過洗滌和洗脫得到目的蛋白，對(duì)于未知蛋白可以通過質(zhì)譜來鑒定，對(duì)于已知蛋白可以通過WB實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。 



第四部分：RNA Pull-down結(jié)果展示

最經(jīng)典的RNA和RBP互作的結(jié)果如下所示：

每個(gè)靶標(biāo)蛋白的RNA探針均需要設(shè)計(jì)2個(gè)，例如RNA結(jié)合蛋白HuR可以和Androgen receptor 3′-UTR RNA結(jié)合，因此每組探針均包含2個(gè)，如下所示：

• 生物素標(biāo)記野生型AR 3′-UTR RNA探針

5′-CUGGGCUUUUUUUUUCUCUUUCUCUCCUUUCUUUUUCUUCUUCCCUCCCUA-3′
250pmol (in 25μL)

• 多聚A陰性對(duì)照探針

poly(A)25 RNA, 250pmol (in 25μL)
 
 
RNA Pull-Down and WB assay of the HuR example
 

 
第五部分：RNA Pull-down試劑盒組分清單
（共計(jì)16個(gè)組分，均可單獨(dú)購買）
 

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