牛痘病毒加帽體系利用牛痘病毒加帽酶及相關組分,將 7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)(m7Gppp,Cap0) 加到 RNA 的 5′末端。在真核生物中,該結(jié)構(gòu)與 mRNA 的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運和翻譯密切相關。使 用酶促反應為 RNA 加帽是一種簡單有效的方法,且帽結(jié)構(gòu)與天然 Cap 0 結(jié)構(gòu)完全一致,能 顯著改善用于體外轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)染和顯微注射的 RNA 的穩(wěn)定性和翻譯能力。該酶由兩個亞基(D1 和 D12)組成,兼具 RNA 三磷酸酶、鳥苷轉(zhuǎn)移酶和鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶的功能,它們對于添 加一個完整的 Cap 0 結(jié)構(gòu) m7Gppp5′N 都是必須的。 由牛痘病毒加帽酶構(gòu)建的帶帽 RNA 產(chǎn)品具有 Cap 0 結(jié)構(gòu)。通過在加帽反應中同時使用 mRNA Cap 2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶和牛痘病毒加帽酶,Cap 0-RNA 可以轉(zhuǎn)化為“ Cap 1”結(jié)構(gòu)。 mRNA Cap 2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶通過將甲基從供體分子 SAM 轉(zhuǎn)移到 Cap 0- RNA 5’端緊鄰帽結(jié) 構(gòu)的第一個核苷酸的 2'-O 位置,從而從 Cap 0-RNA 制備 Cap 1-RNA。
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