| 體外 | 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯抑制增殖并誘導(dǎo)人前單核細(xì)胞白血病細(xì)胞的 GSH 依賴性細(xì)胞死亡。14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯 （AND2） 是穿心蓮內(nèi)酯的類似物，對(duì)人原單核細(xì)胞白血病 （THP-1） 細(xì)胞的細(xì)胞毒性比貼壁癌細(xì)胞系更有效。
方法和結(jié)果：
在本研究中，從植物穿心蓮中分離出 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯并對(duì)其進(jìn)行表征。通過 MTT 法評(píng)價(jià) 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對(duì)貼壁 （PC-3 和 MDAMB） 和非貼壁 （THP-1 和 Jurkat） 癌細(xì)胞系的抗增殖作用。通過對(duì) GSH 預(yù)處理的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活力測(cè)定，研究了細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽 （GSH） 對(duì) 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的影響。通過分析內(nèi)源性還原的 GSH 含量，確定 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對(duì) THP-1 細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的影響。使用抗 caspase-3 蛋白抗體通過 DNA 階梯測(cè)定和 Western blot 分析證實(shí)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)。14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對(duì) THP-1 和 Jurkat 癌細(xì)胞系均具有抗增殖作用，IC50 值低。GSH 預(yù)處理逆轉(zhuǎn)了 AND2 的細(xì)胞毒性。AND2 處理使 THP-1 癌細(xì)胞系中的 GSH 含量降低了 19.76% （p < 0.001），并減少了 THP-1 細(xì)胞之間的細(xì)胞聚集。在 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯處理的時(shí)間過程中，THP-1 細(xì)胞中 procaspase-3 的表達(dá)發(fā)生了變化。Procaspase-3 表達(dá)在 32 小時(shí)時(shí)在處理的細(xì)胞中達(dá)到最大值，并在 48 小時(shí)時(shí)顯著降低，但未觀察到 procaspase-3 切割。獲得的結(jié)果表明，14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對(duì)白血病細(xì)胞更有效。14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞氧化還原介導(dǎo)的細(xì)胞死亡。
結(jié)論：
由于 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯在治療過程中暫時(shí)增加了 procaspase-3 的表達(dá)，本研究鼓勵(lì) 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯與直接激活 procaspase-3 為 caspase-3 的小分子聯(lián)合使用針對(duì)前單核細(xì)胞白血病細(xì)胞的臨床前測(cè)試。 穿心蓮內(nèi)酯和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對(duì)培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞和 PC12 細(xì)胞的影響。測(cè)試穿心蓮內(nèi)酯 （AP1） 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯 （AP2） 對(duì)富含星形膠質(zhì)細(xì)胞的環(huán)境中嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系 12 （PC12） 細(xì)胞的影響。
方法和結(jié)果：
測(cè)試了 AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯減少刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素 （IL）-1 、 IL-6 和腫瘤壞死因子 （TNF） -α 的能力。此外，使用氧化敏感熒光染料測(cè)試了 AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯降低星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的能力。使用斑點(diǎn)印跡法檢測(cè)刺激的星形膠質(zhì)細(xì)胞中硫酸軟骨素蛋白多糖 （CSPG） 的減少。在 PC12 細(xì)胞中測(cè)試了 H（2）O（2） 誘導(dǎo)的死亡的減少。星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基 （ACM） 和 TNF α刺激的星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基 （SACM） 用于評(píng)估 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對(duì) H（2）O（2） 處理的 PC12 細(xì)胞的影響。AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯減少了 TNF α刺激的星形膠質(zhì)細(xì)胞中的促炎細(xì)胞因子、活性氧 （ROS） 和 CSPG。AP1 保護(hù)在 ACM 中培養(yǎng)的 H（2）O（2） 處理的 PC12 細(xì)胞。PC12 細(xì)胞在 H（2）O（2） 中共孵育，并從 AP1 處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞中收集的 ACM 不能防止細(xì)胞死亡。
結(jié)論：
AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯有效改善星形膠質(zhì)細(xì)胞促炎反應(yīng)，預(yù)防 PC12 細(xì)胞死亡，療效不同。這些化合物可能是治療脊髓損傷和神經(jīng)退行性變的候選藥物。 |
| 體內(nèi) | 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯在麻醉大鼠和離體右心房中的心血管活性。方法和結(jié)果：
穿心蓮 （Burm.f.） 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯 （DDA） 的心血管活性在麻醉的 Sprague-Dawley （SD） 大鼠和分離的大鼠右心房中闡明了 Nees （Acanthaceae）。在麻醉大鼠中，DDA 以劑量依賴性方式使平均動(dòng)脈血壓 （MAP） 和心率顯著下降，最大下降幅度分別為 37.6 +/- 2.6% 和 18.1 +/- 4.8%。MAP 的 ED50 值為 3.43 mmol kg-1。使用該劑量進(jìn)行藥理學(xué)拮抗劑研究。DDA 的降壓作用不是通過對(duì) α-腎上腺素能受體、毒蕈堿膽堿能和組胺能受體的影響來介導(dǎo)的，因?yàn)樗皇芊油桌?、阿托品以及嘧啶和西咪替丁的影響。然而，它似乎通過腎上腺素能受體、自主神經(jīng)節(jié)受體和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶起作用，因?yàn)樵谄蛰谅鍫枴⒓好冷@和卡托普利存在下，DDA 的降壓作用被抵消或減弱。在離體的右心房中，DDA 以非競(jìng)爭(zhēng)性和劑量依賴性方式引起負(fù)嗜時(shí)作用并拮抗異丙腎上腺素誘導(dǎo)的正嗜時(shí)作用。
結(jié)論：
這些結(jié)果進(jìn)一步支持 DDA 在體內(nèi)的心動(dòng)過緩誘導(dǎo)和 β-腎上腺素能受體拮抗特性。 |