GENIUS?Nuclease核酸酶
Source
GENIUS?Nuclease核酸酶是粘質(zhì)沙雷氏菌細胞外內(nèi)切酶的重組形式,在大腸桿菌細胞中使用ACR-Obiosystems的專有工藝生產(chǎn)。GENIUS?Nuclease核酸酶是一種單體分子量約為30 kDa的同二聚體。核酸酶中發(fā)現(xiàn)的兩個二硫鍵對其活性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。該酶是一種非特異性核酸酶,具有高比活性,可以降解任何形式的單鏈和雙鏈核酸(單鏈、雙鏈、線性、環(huán)狀和超螺旋)。它將核苷酸之間的內(nèi)部磷酸二酯鍵水解為長度為3-5個堿基的5'-磷酸化寡核苷酸。
Application
其高內(nèi)在活性和廣泛的底物耐受性使內(nèi)切核酸酶成為各種生物技術(shù)和制藥應用中的理想工具:從蛋白質(zhì)樣品中去除核酸(從重組蛋白質(zhì)中去除核酸;從包涵體中純化蛋白質(zhì)片段;蛋白質(zhì)印跡或二維凝膠電泳中的樣品制備);蛋白質(zhì)提取物的粘度降低。
Operating conditions
GENIUS?Nuclease核酸酶在pH 6至10(最適pH 8-8.5)和0℃至42℃(最適35℃-42℃)之間有作用。酶活性需要Mg2+(1-2mM)。
在1mM MgCl2存在下,1mM EDTA使活性降低了30%;0.1 M EDTA消除了所有酶活。在1 mM MgCl2存在下,0.1 M CaCl2或1 M NaCl使酶水平降低了75%。在標準測定條件下,1 mM碘乙酸鹽對酶速率沒有影響,而1 mM巰基乙醇和馬來酸僅使活性降低了5%至10%。10 mM苯甲酸對氯汞完全滅活酶,而在2 M尿素存在下,0.64 Mβ-巰基乙醇僅導致酶部分滅活。4或7M尿素增加酶活性。
Removal of GENIUS?Nuclease
GENIUS?Nuclease核酸酶沒有“Tag”,用于下游加工的核酸酶可以根據(jù)靶蛋白的純化策略通過各種純化方法去除。
Formulation
在pH 8.0的Tris-HCl、MgCl2和NaCl中凍干。
Reconstitution
復溶說明和具體濃度見分析證書。
Purity
>95 % as determined by SDS-PAGE reduced GENIUS?Nuclease.
Enzyme Activity
>250U/μL
Activity Assay Procedure
1. Reagents and solutions preparation
Reaction buffer*:
50 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, pH 8.0 (*在使用前廣泛稀釋的情況下,通常建議使用0.1 mg/ml HSA或BSA等載體蛋白,以避免表面吸附造成的任何酶損失)
DNA Substrate:
將1mg/ml鮭魚精子DNA在4℃下在反應緩沖液中溶解過夜,然后在冰上超聲處理以獲得均勻的溶液。
Enzyme:
用反應緩沖液對核酸酶進行不同稀釋。
Stop reagent:
三氯乙酸(TCA)
2. Standard curve establishment
400μl底物+100μl已知活性的酶=500μl混合物
①將混合物在37℃下孵育30分鐘。
②通過加入400μl冷TCA停止反應,并在冰上孵育10分鐘。
③在8500g下離心5分鐘。
④在260nm處測量上清液的吸光度。
⑤用已知活性的核酸酶繪制每組測量的標準曲線。
3. Measurement of activity
任何未知核酸酶的活性都可以通過標準曲線從一次測量中確定。GENIUS?核酸酶的比活性大于1.0 x 10e6單位/mg蛋白質(zhì)。
Activity
上圖為GENIUS?核酸酶的核酸酶活性標準曲線。
Unit Definition
一個裝置將在37℃、pH 8.0的條件下,在30分鐘內(nèi)將超聲波處理的鮭魚精子DNA消化為酸溶性寡核苷酸,相當于ΔA260為1.0,這大約相當于完全消化37μg DNA。注意1 KU=1000 units.
Storage
避免反復凍融循環(huán)。
本產(chǎn)品在以下條件下儲存后穩(wěn)定。
凍干狀態(tài)下1年(-20℃);在無菌條件下(-70℃)復溶3個月。
注意:我們已將品牌名稱從Benz?核酸酶更新為GENIUS?核酸酶。產(chǎn)品相同,僅有產(chǎn)品名稱和標簽中的品牌名稱變化。
關(guān)鍵字: Nuclease;核酸酶;Nuclease核酸酶;ACRO;百普賽斯;
百普賽斯集團ACROBiosystems Group(股票代碼:301080)是成立于2010年的跨國生物科技公司,是為全球生物醫(yī)藥、健康產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域提供關(guān)鍵生物試劑產(chǎn)品及解決方案的行業(yè)平臺型基石企業(yè)。2021年在創(chuàng)業(yè)板上市。百普賽斯集團業(yè)務遍布全球,橫跨亞洲、北美洲、歐洲,在中國、美國、瑞士等12個城市設(shè)有辦公室、研發(fā)中心及生產(chǎn)基地。目前累計服務客戶超6000家,與全球Top 20醫(yī)藥企業(yè)均建立了長期、穩(wěn)定的合作伙伴關(guān)系。集團旗下?lián)碛衅放艫CROBiosystems百普賽斯、bioSeedin柏思薈、Condense Capital墾拓資本和ACRODiagnostics百斯醫(yī)學等。