GENIUS?Nuclease核酸酶

Source

GENIUS?Nuclease核酸酶是粘質(zhì)沙雷氏菌細胞外內(nèi)切酶的重組形式，在大腸桿菌細胞中使用ACR-Obiosystems的專有工藝生產(chǎn)。GENIUS?Nuclease核酸酶是一種單體分子量約為30 kDa的同二聚體。核酸酶中發(fā)現(xiàn)的兩個二硫鍵對其活性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。該酶是一種非特異性核酸酶，具有高比活性，可以降解任何形式的單鏈和雙鏈核酸（單鏈、雙鏈、線性、環(huán)狀和超螺旋）。它將核苷酸之間的內(nèi)部磷酸二酯鍵水解為長度為3-5個堿基的5'-磷酸化寡核苷酸。

Application

其高內(nèi)在活性和廣泛的底物耐受性使內(nèi)切核酸酶成為各種生物技術(shù)和制藥應用中的理想工具：從蛋白質(zhì)樣品中去除核酸（從重組蛋白質(zhì)中去除核酸；從包涵體中純化蛋白質(zhì)片段；蛋白質(zhì)印跡或二維凝膠電泳中的樣品制備）；蛋白質(zhì)提取物的粘度降低。

Operating conditions

GENIUS?Nuclease核酸酶在pH 6至10（最適pH 8-8.5）和0℃至42℃（最適35℃-42℃）之間有作用。酶活性需要Mg2+（1-2mM）。

在1mM MgCl2存在下，1mM EDTA使活性降低了30%；0.1 M EDTA消除了所有酶活。在1 mM MgCl2存在下，0.1 M CaCl2或1 M NaCl使酶水平降低了75%。在標準測定條件下，1 mM碘乙酸鹽對酶速率沒有影響，而1 mM巰基乙醇和馬來酸僅使活性降低了5%至10%。10 mM苯甲酸對氯汞完全滅活酶，而在2 M尿素存在下，0.64 Mβ-巰基乙醇僅導致酶部分滅活。4或7M尿素增加酶活性。

Removal of GENIUS?Nuclease

GENIUS?Nuclease核酸酶沒有“Tag”，用于下游加工的核酸酶可以根據(jù)靶蛋白的純化策略通過各種純化方法去除。

Formulation

在pH 8.0的Tris-HCl、MgCl2和NaCl中凍干。

Reconstitution

復溶說明和具體濃度見分析證書。

Purity

>95 % as determined by SDS-PAGE reduced GENIUS?Nuclease.

Enzyme Activity

>250U/μL

Activity Assay Procedure

1. Reagents and solutions preparation

Reaction buffer*:

50 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, pH 8.0 (*在使用前廣泛稀釋的情況下，通常建議使用0.1 mg/ml HSA或BSA等載體蛋白，以避免表面吸附造成的任何酶損失）

DNA Substrate:

將1mg/ml鮭魚精子DNA在4℃下在反應緩沖液中溶解過夜，然后在冰上超聲處理以獲得均勻的溶液。

Enzyme:

用反應緩沖液對核酸酶進行不同稀釋。

Stop reagent:

三氯乙酸（TCA）

2. Standard curve establishment

400μl底物+100μl已知活性的酶=500μl混合物

①將混合物在37℃下孵育30分鐘。

②通過加入400μl冷TCA停止反應，并在冰上孵育10分鐘。

③在8500g下離心5分鐘。

④在260nm處測量上清液的吸光度。

⑤用已知活性的核酸酶繪制每組測量的標準曲線。

3. Measurement of activity

任何未知核酸酶的活性都可以通過標準曲線從一次測量中確定。GENIUS?核酸酶的比活性大于1.0 x 10e6單位/mg蛋白質(zhì)。

Activity

上圖為GENIUS?核酸酶的核酸酶活性標準曲線。

Unit Definition

一個裝置將在37℃、pH 8.0的條件下，在30分鐘內(nèi)將超聲波處理的鮭魚精子DNA消化為酸溶性寡核苷酸，相當于ΔA260為1.0，這大約相當于完全消化37μg DNA。注意1 KU=1000 units.

Storage

避免反復凍融循環(huán)。

本產(chǎn)品在以下條件下儲存后穩(wěn)定。

凍干狀態(tài)下1年（-20℃）；在無菌條件下（-70℃）復溶3個月。

注意：我們已將品牌名稱從Benz?核酸酶更新為GENIUS?核酸酶。產(chǎn)品相同，僅有產(chǎn)品名稱和標簽中的品牌名稱變化。