細(xì)胞名稱:小鼠胰腺癌細(xì)胞/胰腺導(dǎo)管癌PAN02/LUC(帶熒光素酶)
細(xì)胞代次:P4
細(xì)胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運(yùn)輸費(fèi))
細(xì)胞凍存:無血清凍存液
細(xì)胞傳代:第一次建議1:2
小鼠胰腺癌細(xì)胞/胰腺導(dǎo)管癌PAN02/LUC(帶熒光素酶)細(xì)胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(換液后將瓶蓋擰松)
1、收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作:
取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細(xì)胞完全貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):有些細(xì)胞貼壁不牢,在運(yùn)輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落,這是正?,F(xiàn)象。如脫離較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25),補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
小鼠胰腺癌細(xì)胞/胰腺導(dǎo)管癌PAN02/LUC(帶熒光素酶),售后服務(wù)
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);
2. 細(xì)胞污染問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細(xì)胞活性問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā);
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費(fèi)重發(fā)。
2)細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
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GT1768LUC | PAN02/LUC | 小鼠胰腺癌細(xì)胞/胰腺導(dǎo)管癌PAN02/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+5%FBS+1%P/S貼壁 |
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GT1772LUC | HL1/LUC | 小鼠心肌細(xì)胞HL1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | MEM+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1773LUC | BV2/LUC | 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV2/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%HEPES+1%P/S貼壁 |
GT1774LUC | STC1/LUC | 小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞STC1/LUC(帶熒光素酶) | 5000 | DMEM+10%FBS+1%P/S |
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GT1776LUC | MPC5/LUC | 小鼠腎足細(xì)胞MPC5/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S |
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GT1791LUC | ATDC5/LUC | 小鼠胚胎瘤細(xì)胞-軟骨細(xì)胞ATDC5/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S |
GT1792LUC | E14/LUC | 小鼠胚胎干細(xì)胞E14/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+15%FBS+0.1uL/mLLIF+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%PS+1uL/mLβ-巰基乙醇+1%P/S培養(yǎng)瓶用0.1%明膠包被細(xì)胞呈集落生長 |
GT1793LUC | 3T3L1/LUC | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3L1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM(含NaHCO31.5g/L)+10%小牛血清+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%P/S |
GT1794LUC | BALB3T3cloneA31/LUC | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞BALB3T3cloneA31/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S80%密度時1:2傳代,生長慢,傳代密度要大 |
GT1795LUC | C3H10T12,Clone8/LUC | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞C3H10T12,Clone8/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | MEM+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1796LUC | MEF/LUC | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | D/F12+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1797LUC | MEF人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH1819/LUC(帶熒光素酶)(絲裂霉素C處理)/LUC | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF(絲裂霉素C處理)/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | D/F12+10%FBS+1%P/S |
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